B细胞是人体免疫系统的重要组成部分.它分泌抗体参与体液免疫,还可作为抗原呈递细胞并分泌一些因子调节细胞免疫.B细胞是由多能造血干细胞发育分化而成的.该过程可分为两上阶段.第一阶段为不依赖抗原的发育阶段,包括由原B细胞经前B细胞和不成熟细胞到成熟细胞的过程,此过程在胚胎发育的早期发生于肝脏,之后发生于骨髓.第二阶段是成熟B细胞在外周淋巴组织中在抗原诱导下活化增殖,最后分化为分泌抗体的浆细胞和记忆B细胞.B细胞的活化是正常免疫应答过程的重要组成部分.对B细胞活化机理的研究除了在理论上有助于对免疫系统功能和调节的了解,还可有助于一些免疫系统异常,包括B淋巴细胞免疫缺损病、B淋巴细胞性白血病以及自身免疫病等的了解,为这类疾病的预防,论断和治疗提供理论依据.首先构建了一个人活化扁桃体B细胞的噬菌株cDNA文库,包括有5×10<5>个克隆,插入片段平均长度为1.4kb,稳定地保存于-80℃.在M13K07辅助噬菌体感染下,制备文库的单链DNA(ssDNA),并以之与过量的静止扁桃体淋巴细胞的cDNA在液相中杂交.用羟基磷灰石层析法去除杂交产生的双链DNA(dsDNA),剩余的ssDNA再进行第二轮削减.所得的ssDNA用Taq DNA聚合酶修复成双链质粒DNA的形式,即可有效地转化大肠杆菌.所得的削减文库约含有3000个克隆.随机挑取削减文库的克隆进行鉴定、发现插入片段大多较短,只有500bp左右.从80个中选取3个较长的克隆进行测序分析.其中一个是细胞色素C1的cDNA;一个是未查到相关信息的新EST;另一个可能是新的功能基因.削减文库中,稀有的序列被富集了,而未检出B细胞中表达极为丰富的免疫球蛋白基因,说明该实验削减cDNA文库的构建是成功的,可以用于筛选有价值的新基因.