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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)是引发猪断奶后多系统衰竭综合征的主要病原。PCV2主要由ORF1和ORF2构成,ORF2基因是PCV2的重要抗原基因,编码病毒的衣壳蛋白(Cap蛋白),在Cap蛋白上存在抗原表位,具有免疫原性,因此ORF2基因成为建立PCV2特异性血清学检测方法及核酸疫苗研究的目的基因。当前国内外尚没有PCV2疫苗可用,因此研制猪圆环病毒2型核酸疫苗对控制猪PCV2病的发生具有重要意义。设计含双酶切位点的引物采用PCR方法扩增PCV2的ORF2全长基因并克隆入pGEM-T easy克隆载体;采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)技术将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因( PoIL-2 )构建成重组嵌合基因(PCV2-linker-PoIL-2)并克隆入pGEM-T easy克隆载体;筛选含PCV2-linker-PoIL-2、PCV2 ORF2的阳性克隆质粒经限制性内切酶双切后连接入经相同酶切的pcDNA3.1(+)真核表达载体中以构建重组表达质粒(rpcDNA3.1/ PCV2-linker-PoIL-2、rpcDNA3.1/ORF2)。筛选阳性重组表达质粒rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2、rpcDNA3.1/ORF2瞬时转染COS-7细胞,分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2、rCap )免疫反应活性;提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒和rpcDNA3.1-OFR2质粒分别对Balb/c小鼠和猪进行三次免疫,采用PCV2抗体ELISA检测方法以评价其免疫效果。结果表明:成功构建了单重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2和PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其共表达质粒rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2 ; rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和rpcDNA3.1/OFR2质粒在COS-7细胞浆内进行了表达,表达的rCap-linker-PoIL-2蛋白可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应,表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重免疫反应活性。rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2抗体,第3次加强免疫后,免疫组抗体滴度最高是空白对照组的3.2倍,且显著高于rpcDNA3.1/OFR2质粒对照组; rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和rpcDNA3.1/ORF2质粒均可诱导猪体产生抗PCV2免疫应答,rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2、rpcDNA3.1/ORF2质粒免疫组抗体滴度分别是空载体对照组的12.46倍、10.13倍,表明PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因中的PoIL-2对rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒在小鼠体内的免疫起到了很好的免疫增强作用。本研究成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其重组表达质粒pcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2;重组表达质粒在COS-7细胞中表达了具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白双重免疫反应活性的融合蛋白,免疫小鼠和猪后可诱导小鼠和猪产生高的抗PCV2抗体,且其诱导的抗体水平明显高于pcDNA3.1/OFR2重组质粒。本研究为PCV2的DNA疫苗研究奠定了基础。