论文部分内容阅读
背景与目的早产在全球的发生率为5%~18%,按原因分为自发性早产、未足月胎膜早破早产和医源性早产。其中,60%的早产属于自发性早产,是导致围产儿病死率居高不下的主要原因。尽管目前已进行大量关于早产防治的基础和临床研究,但早产率仍较高。近年有研究表明组织学绒毛膜羊膜炎(histologic chorioamnionitis,HCA)与自发性早产的发生密切相关。HCA不等同于宫内感染,其由微生物入侵或“危险信号”释放引起,发病隐匿,无明显临床表现,可导致新生儿不良结局,且与孕周明显相关,即孕周越小,HCA发生概率越大。目前已发现的危险信号分子包括HSP70(heat shock protein,HSP70),其是一类在生物界广泛表达的高保守蛋白质,当受到缺血、缺氧、高温、感染等刺激时表达增加。以往认为HSP70是细胞内蛋白质,作为“分子伴侣”参与蛋白质的折叠、解聚、易位等;近年研究发现,HSP70可释放到细胞外,参与激活先天性和适应性免疫反应。因此,本研究通过检测孕妇胎膜组织中HSP70的表达和外周血、脐血中HSP70的水平,探讨HSP70与自发性早产及其合并HCA的关系。材料与方法1.研究对象选择2015年6月~2017年1月在郑州大学第三附属医院产科住院并分娩的自发性早产孕妇63例,根据产后胎膜组织病理学检查进一步分为合并HCA孕妇26例(早产合并HCA组),未合并HCA孕妇37例(早产未合并HCA组);选择同期正常足月分娩的孕妇32例(足月正常组)。2.实验方法(1)采用免疫组化SP法检测胎膜组织中HSP70蛋白的定位及阳性表达率;(2)采用实时荧光定量PCR法检测胎膜组织中HSP70 m RNA的表达;(3)采用蛋白印迹法检测胎膜组织中HSP70蛋白的表达;(4)采用ELISA法检测外周血、脐血中HSP70的水平;(5)比较母儿围产结局。3.统计学处理采用SPSS 21.0软件行统计学分析,正态分布的计量资料采用(?)±s表示,多组定量资料采用单因素方差分析或Kruskal-Wallis秩和检验。计数资料采用百分率表示,组间比较采用χ2检验。相关性分析用Pearson检验。检验水准α=0.05。组间两两比较时采用校正检验水准α′=α/比较次数=0.0167。结果1.孕妇一般情况比较三组孕妇分娩孕周比较,早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别小于足月正常组,差异均有统计学意义(P<0.01)。三组孕妇年龄、初产妇比例、入院分娩前体重指数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2.胎膜组织中HSP70蛋白的定位及阳性表达率免疫组化SP法检测显示,HSP70表达于绒毛膜和羊膜上皮细胞的细胞质和细胞膜。早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组胎膜组织中HSP70蛋白的阳性表达率分别为92%(24/26)、65%(24/37)、34%(11/32)。三组比较,早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组,差异均有统计学意义(P<0.01);早产合并HCA组高于早产未合并HCA组,差异具有统计学意义(P<0.01)。3.胎膜组织中HSP70 m RNA的表达实时荧光定量PCR法检测显示,早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组的胎膜组织中HSP70 m RNA的相对表达量分别为(1.203±0.350)、(0.947±0.140)、(0.657±0.175)。三组比较,早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组,差异均有统计学意义(P<0.01);早产合并HCA组高于早产未合并HCA组,差异具有统计学意义(P<0.01)。4.胎膜组织中HSP70蛋白的表达蛋白印迹法检测显示,早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组的胎膜组织中HSP70蛋白的相对表达量分别为(1.001±0.055)、(0.879±0.041)、(0.521±0.032)。三组比较,早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组,差异均有统计学意义(P<0.01);早产合并HCA组高于早产未合并HCA组,差异具有统计学意义(P<0.01)。5.外周血和脐血中HSP70的水平ELISA法检测显示:早产合并HCA组、早产未合并HCA组及足月正常组孕妇外周血中HSP70的水平分别为(1.601±0.168)ng/m L、(1.245±0.092)ng/m L、(0.786±0.093)ng/m L;新生儿脐血中HSP70的水平分别为(0.935±0.082)ng/m L、(0.756±0.056)ng/m L、(0.577±0.075)ng/m L。三组孕妇外周血、新生儿脐血中HSP70的水平比较,早产合并HCA组和早产未合并HCA组分别高于足月正常组,差异均有统计学意义(P<0.01);早产合并HCA组高于早产未合并HCA组,差异具有统计学意义(P<0.01)。6.早产合并HCA组血清和胎膜组织中HSP70的相关性分析早产合并HCA组孕妇外周血与新生儿脐血中HSP70的水平呈正相关(r=0.782,P<0.05);早产合并HCA组孕妇外周血中HSP70水平与胎膜组织中HSP70蛋白的相对表达量呈正相关(r=0.819,P<0.05)。7.母儿结局的比较三组孕妇均无产后出血、产褥感染发生。早产合并HCA组中5例(19%)发生新生儿败血症,而早产未合并HCA组和足月正常组无新生儿败血症,三组比较,差异具有统计学意义(F=14.006,P<0.05)。结论HSP70与早产合并HCA的发生发展有关,可能发挥其先天性促炎免疫反应;同时HSP70可能通过多种机制参与早产的发生。