目的：　　多囊卵巢囊肿(Polycystic Ovary Syndrome，PCOS)是女性常见的内分泌及代谢异常性疾病，是导致女性不孕的主要原因之一。PCOS临床表现包括不规律或无月经、月经稀发、体面多毛、痤疮、骨盆痛、黑棘皮症。患有PCOS的女性也会增加其他相关疾病患病风险如胰岛素耐受、代谢功能障碍、葡萄糖耐受不良、糖尿病和心血管疾病。PCOS患者以雄激素过多症、多囊卵巢及排卵功能障碍等症状为主要特征。　　脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone，DHEA)，也称雄烯酮，通常以硫酸盐形式(DHEAS)作为前体分子储存发挥作用，并合成性类固醇激素。它主要由肾上腺、性腺生成，并作为代谢中间物在雄激素和雌性激素的生物合成中起作用，其下游主要的合成激素之一为睾酮。普遍认为，PCOS的病理变化与体内雄激素水平过高密切相关。妊娠期间，DHEA是胎盘中雌性激素合成的主要来源，而且DHEA可以通过调节细胞因子水平来影响免疫反应，以确保妊娠胚胎发育。机体DHEA减少或DHEA异常会使卵巢功能失衡、激素紊乱，异常增高的DHEA水平会对胚胎功能造成不利，影响胚胎的侵袭植入及生长发育，致使反复流产。在目前PCOS研究中，DHEA常被用于制备PCOS模型。DHEA诱导的PCOS大鼠模型会出现卵巢囊肿，卵巢重量增加并伴有颗粒细胞减少或退化的现象。PCOS大鼠血清中睾酮升高，会有雄激素血症、无排卵、胰岛素耐受以及葡萄糖代谢失常等症状出现，能较为全面的表现PCOS的多种表型，与临床上人PCOS病理变化相近。氟他米特是雄激素受体(Androgen Receptor，AR)的选择性拮抗剂，在机体组织中能与睾酮竞争性结合AR，抑制睾酮激素作用。　　炎症是机体对有害刺激的一种防御性反应，其作用是消除细胞损伤源头，清除损坏细胞和组织及其异源物质，并促使修复。炎症分为急性和慢性两种。研究发现，大多PCOS症状与慢性炎症相关。慢性炎症可以导致在炎症部位细胞渐进转变。干扰素γ（IFN-γ）属于炎性因子，IFN-γ有抗病毒、免疫调节、抗肿瘤等特征，在慢性炎症修复中尤其重要。　　干扰素γ（IFN-γ）是一种可溶的二聚体细胞因子，是Ⅱ型干扰素家族唯一成员。在人体中，IFN-γ蛋白由IFNG基因编码。IFN-γ可由多种细胞生成，包括NK、NKT及非细胞毒性固有淋巴细胞，它由CD4Thl和CD8CTL效应T细胞抗原特异性免疫加工，并参与先天性免疫反应。妊娠中，子宫NK细胞会分泌大量IFN-γ，它可使母体螺旋动脉扩张变薄以加强血液流入着床位点，有助于胎盘发育及满足胚胎进入子宫时对营养的需求。在卵泡发育过程中，IFN-γ主要富集在颗粒细胞和卵母细胞中，并对颗粒细胞具有重要的调节作用。　　颗粒细胞是卵泡中卵母细胞周围扁平状细胞，对卵子的发育起到营养支持的作用，卵子成熟过程中，颗粒细胞合成激素细胞因子类物质存进卵子的发育成熟，并促进卵子的排出。　　本研究利用人PCOS血清、大鼠PCOS模型和人卵巢颗粒细胞(KGN)、人胚胎滋养层细胞(JAR)，研究DHEA升高导致的PCOS中IFN-γ的表达及对颗粒细胞及胚胎细胞功能的影响。探讨IFN-γ在PCOS发生发展中的作用及机制，为临床上以IFN-γ为靶点的PCOS的诊断及治疗提供理论依据。　　方法：　　1.IFN-γ在PCOS患者与大鼠模型血清和组织中的表达　　1)DHEA大鼠皮下注射制备PCOS模型，并验证PCOS的形态激素特征。　　2)蛋白质芯片技术检测PCOS大鼠血清中细胞因子的变化。　　3)免疫组织化学方法检测PCOS大鼠卵巢组织的变化以及IFN-γ表达。　　4)ELISA、Western blot检测PCOS大鼠及PCOS患者血清中IFN-γ表达水平。　　2.IFN-γ在DHEA作用下卵巢颗粒细胞中的表达研究　　1)DHEA、氟他米特处理KGN细胞，通过Real-time PCR、Western blot及免疫荧光技术检测DHEA和氟他米特对KGN细胞中IFN-γ表达的影响。　　2)DHEA、氟他米特及IFN-γ分组处理KGN细胞，通过CCK-8、Western blot及TUNEL方法检测三种因素对KGN细胞增殖和凋亡能力的影响。　　3.IFN-γ和DHEA对胚胎滋养层JAR细胞功能的影响　　1)DHEA、氟他米特及IFN-γ分组处理JAR细胞。　　2)通过Western blot方法检测三者对JAR细胞IFN-γ表达的影响。　　3)通过Western blot、CCK-8方法检测三种因素对JAR细胞增值能力的影响。　　4)通过Transwell、明胶酶谱方法检测三种因素对JAR细胞迁移和侵袭能力的影响。　　结果：　　1.IFN-γ在PCOS患者与大鼠模型血清和组织的表达　　1)血清蛋白芯片结果显示，与对照组相比较，DHEA诱导的PCOS大鼠模型血清中IFN-γ表达显著降低，氟他米特治疗组中IFN-γ表达回调。　　2)免疫组织化学、ELISA及血清Westernblot结果表明，PCOS大鼠模型中IFN-γ在卵巢血清中表达明显降低，在氟他米特治疗组中一定程度回调。　　3)ELISA、Western blot检测PCOS患者血清结果表明，PCOS患者血中IFN-γ表达降低。　　2.IFN-γ在DHEA作用下卵巢颗粒细胞中的表达研究　　1)Western blot、Real-time PCR及免疫荧光结果表明，DHEA抑制KGN细胞中IFN-γ的表达，且水平随DHEA浓度升高以及作用时间延长而降低，氟他米特则可以减弱DHEA的抑制作用。　　2)CCK-8、Western blot、TUNEL结果显示，DHEA抑制细胞周期蛋白的表达及PI3K/AKT信号通路的激活促进凋亡蛋白的表达;IFN-γ、氟他米特可以减弱DHEA的作用。　　3.IFN-γ和DHEA对胚胎滋养层JAR细胞功能的影响　　1)Western blot结果显示，DHEA抑制JAR细胞中IFN-γ的表达，且随DHEA作用浓度升高及作用时间延长而降低;氟他米特、IFN-γ可恢复其表达水平。　　2)CCK-8、Western blot结果表明，DHEA抑制JAR细胞增殖能力以及细胞周期相关蛋白的表达;IFN-γ、氟他米特作用结果相反。　　3)Transwell、明胶酶谱结果显示，DHEA抑制JAR细胞的迁移和侵袭能力减弱，抑制MMP-9、MMP-2的活性。　　结论：　　1.IFN-γ在PCOS患者与大鼠模型血清和组织的表达　　1)DHEA诱导的PCOS大鼠血清与对照大鼠血清中细胞因子有差异表达。　　2)DHEA下调PCOS大鼠血清中IFN-γ的表达，在氟他米特作用下回调。　　3)PCOS大鼠血清IFN-γ水平与PCOS患者血清检测一致。　　2.IFN-γ在DHEA作用下卵巢颗粒细胞中的表达研究　　1)DHEA下调卵巢颗粒细胞IFN-γ表达水平并呈时间和剂量依赖性。　　2)IFN-γ促进卵巢颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡，DHEA抑制IFN-γ作用。　　3)IFN-γ激活PI3K/AKT信号通路，DHEA抑制IFN-γ激活作用。　　3.IFN-γ和DHEA对胚胎滋养层JAR细胞功能的影响　　1)IFN-γ促进其在JAR细胞中的表达，DHEA抑制IFN-γ的促进作用。　　2)IFN-γ促进JAR细胞增殖，DHEA抑制JAR细胞增殖。　　3)IFN-γ促进JAR细胞的迁移和侵袭能力，DHEA抑制IFN-γ的促进作用。