速灭威等化学农药免疫速测技术研究

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以速灭成农药生产中间体间-甲基苯酚和β-丙氨酸作为主要原料合成了速灭威农药分子类似结构HOM并通过质谱鉴定;利用活泼酯法将具有羧基末端(-COOH)的HOM偶联到大分子蛋白质BSA及OVA上,紫外-可见光谱扫描表明载体蛋白在280nm左右的吸收峰形于偶联前后发生明显变化,且HOM与BSA及OVA的估算结合比分别为33和17。 用上述自制的HOM-BSA免疫原制备了抗体Ab01和Ab02,抗血清滴度分别达到6.4×10~5和1.28×10~6;抗体Ab02经特异性测定,对速灭威以外的氨基甲酸酯类农药残杀威等6个品种的交叉反应率均小于0.1%;确定了速灭威ELISA最佳检测条件:包被HOM-OVA 0.6μg/ml,抗体工作浓度为抗血清20000倍,1%明胶作封闭物,反应基质PBST中离子强度为3.2mol/L,含甲醇5%,适合pH范围为7.4~9;以结合率(B/Bo)的Logit值为纵坐标、速灭威浓度(ug/L)对数值(X)为横坐标建立检测曲线,速灭威浓度在1~10000μg/L范围内Logit(B/Bo)与LogX呈现显著线性关系,检测方程为Y=-0.9404X+1.5146,相关系数R~2=0.9939,检测极限值(灵敏度)为0.013μg/L,批内变异系数2.9%,批间变异系数4.6%,水和土壤中的添加回收率分别为107%和80%。 用有机磷农药的重要中间体二甲氧基磷酰氯为主要原料合成了甲胺磷的类似结构HM3和HM4,并通过了质谱结构鉴定;此HM3和HM4作为半抗原通过NHS/DCC方法偶联合成了甲胺磷人工抗原,可见-紫外光谱扫描结果表明偶联物峰形与载体蛋白的峰形发生了明显变化,经分析说明HM3-BSA、HM3-OVA、HM4-BSA和HM4-OVA偶联成功。用合成的HM3-BSA和HM4-BSA作免疫原制备得到能够对甲胺磷农药有很强识别能力的兔多克隆抗体。 用邻-异丙氧基苯酚和γ-丁胺酸为主要原材料合成了残杀成的类似结构HOP,并通过质谱结构鉴定;以此作为半抗原与大分子载体蛋白BSA及OVA通过NHS/DCC方法进行偶联,偶联物经紫外-可见光谱扫描鉴定,结果表明偶联物峰形与载体蛋白的峰形发生了明显变化,估算偶联结合比HOP-BSA为26,HOP-OVA为14;以HOM-BSA作为免疫原制备得到能够识别残杀威的兔多克隆抗体。
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