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第一部分:HAP1/GABAAR β 2/3在癫痫大脑中的表达目的:检测HAP1/GABAAR β 2/3在癫痫患者及戊四氮点燃癫痫模型脑组织中的表达。方法:1.从重庆医科大学第一附属医院的癫痫患者术后脑组织库随机抽取癫痫患者和同期脑外伤患者皮质标本,每组各20例。2.戊四氮（35mg/kg,IP）点燃成年雄性SD大鼠,观察并记录点燃过程中的发作分级。3.免疫印迹检测GABAAR β 2/3在癫痫患者及戊四氮点燃癫痫大鼠中的表达。4.定量免疫共沉淀检测癫痫患者及戊四氮点燃癫痫大鼠中HAP1与GABAARβ 2/3相互作用程度。5.体内多通道脑电图记录戊四氮点燃癫痫大鼠海马CA1区局部场电位。6.全细胞膜片钳记录戊四氮点燃癫痫大鼠海马CA1区抑制性突触后电流。结果:1.HAP1在癫痫患者脑组织中及戊四氮点燃癫痫大鼠中表达较正常对照组明显降低（**P<0.01）。2.GABAAR β 2/3在癫痫患者脑组织及戊四氮点燃癫痫模型中表达较正常对照组明显降低（***P<0.001）。3..HAP1与GABAAR β 2/3相互作用程度在癫痫患者脑组织及戊四氮点燃癫痫大鼠中较对照组明显降低（*P<0.05）。4.体内多通道脑电图记录示戊四氮点燃癫痫大鼠棘波尖波发放。5.全细胞膜片钳记录示戊四氮点燃癫痫大鼠海马CA1区神经元微小抑制性突触后电流（mIPSC）频率和幅值较对照组明显减少（**P<0.01）。结论:1.癫痫患者和癫痫动物模型脑组织中HAP1表达均显著下降,提示HAP1有可能参与了癫痫的发作。2.癫痫脑组织中GABAAR β 2/3的表达较正常对照组降低,提示GABAAR介导的抑制性突触传递障碍致癫痫发作,可能是由于GABAAR β2/3表达下调所致。3.癫痫患者和癫痫动物模型脑组织中HAP1与GABAAR β 2/3的相互作用程度降低。进一步提示HAP1有可能参与癫痫发作,并且可能是通过调节GABAAR β 2/3来实现。4.戊四氮点燃癫痫大鼠中,GABAAR介导的神经元突触后抑制效应明显减弱。第二部分HAP1对戊四氮癫痫模型行为学的影响目的:为进一步探讨HAP1在癫痫发作中的作用,我们应用慢病毒（LV-HAP1,HAP1-siRNA）调控HAP1的蛋白表达水平,观察HAP1对戊四氮癫痫模型行为学的影响。方法:1.免疫荧光检测HAP1在癫痫患者及戊四氮点燃癫痫大鼠模型中的定位。2.构建携带有过表达HAP1（LV-HAP1）和干扰RNA（HAP1-siRNA）的慢病毒载体。3.免疫荧光,免疫印迹检测慢病毒转染大鼠海马效率。4.成年雄性SD大鼠50只（200±20g,2-3月龄）随机分为Control 组（n=10）、LV-GFP 组（n=10）、Scr-siRNA 组（（n=10））,LV-HAP1组（n=10）和HAP1-siRNA组（n=10）,分别在大鼠双侧海马CA1区微量注射20 μ 1病毒溶液。注射完毕后14天予以戊四氮点燃。5.行为学评分:分别观察各组PTZ严重程度评分、癫痫发作潜伏期、每只大鼠（强直-阵挛）GTCs发作次数。结果:1.HAP1在癫痫患者皮层、戊四氮点燃癫痫大鼠皮层及海马均有表达,与神经元的标记物MAP2共定位,与星形胶质细胞的标记物GFAP不共定位;2.大鼠慢病毒注射第14天,免疫荧光示携带绿色荧光的慢病毒转染海马区域。3.免疫印迹示HAP1-siRNA组7d,14dHAP1总蛋白较Control组明显降低,差异有统计学意义（**P<0.01）;LV-HAP1组14d,30dHAP1总蛋白较Control组明显升高,差异有统计学意义（*P<0.05）。4.行为学评分:LV-HAP1组PIZ严重程度评分,每只大鼠（强直-阵挛发作）GTCs发作次数较LV-GFP及Control对照组减轻,差异有统计学意义（*P<0.05）,潜伏期较LV-GFP及Control对照组稍微延长,差异无统计学意义（*P>0.05）;HAP1-siRNA组PTZ严重程度评分较Scr-siRNA及Control对照组加重,差异有统计学意义（*P<0.05）;潜伏期较Scr-siRNA及Control对照组稍微缩短,差异无统计学意义（*P>0.05）;每只大鼠GTCs发作次数较Scr-siRNA及Control对照组轻微增加,差异无统计学意义（*P>0.05）。结论:1.HAP1在神经元上表达,在胶质细胞不表达。2.通过戊四氮癫痫模型证实,在癫痫发作过程中,干预HAP1可影响癫痫发作。上调HAP1的表达使癫痫严重程度和癫痫易感性减轻;下调HAP1的表达使癫痫严重程度和癫痫易感性增加。这些结果提示HAP1参与癫痫发作。第三部分HAP1通过调节GABAAR β 2/3参与癫痫发作目的:通过观察HAP1对GABAAR β 2/3的影响,以探讨HAP1参与癫痫发作的机制。方法:1.免疫荧光检测HAP1与GABAARβ2/3在癫痫患者脑组织、戊四氮点燃癫痫大鼠脑组织中的共定位。2.免疫共沉淀检测HAP1与GABAAR β 2/3在癫痫患者脑组织、戊四氮点燃癫痫大鼠脑组织中的相互作用。3.成年雄性SD大鼠60只（200±20g,2-3月龄）随机分为Control 组、LV-GFP 组、Scr-siRNA组、LV-HAP1 组、HAP1-siRNA 组（n=10）和LV-HAP1+PTX组,分别在大鼠双侧海马CA1区微量注射20 μ 1病毒溶液。LV-HAP1+PTX组注射完毕后2周予以印防己毒素（PTX）腹腔注射,5min后戊四氮点燃。4.行为学评分:分别观察各组PTZ严重程度评分、癫痫发作潜伏期、每只大鼠GTCs发作次数。5.免疫印迹检测HAP1对GABAARβ 2/3总蛋白和膜蛋白的影响。6.定量免疫共沉淀检测HAP1对HAP1与GABAARβ 2/3相互作用程度的影响。7.全细胞膜片钳检测HAP1对mIPSC的频率,幅值的影响。结果:1.免疫荧光示HAP1在癫痫患者脑组织、戊四氮点燃癫痫大鼠皮层及海马中均与GABAAR β 2/3共定位。2.免疫共沉淀示癫痫患者脑组织、戊四氮点燃癫痫大鼠海马中HAP1与GABAAR β 2/3存在相互作用。3.LV-HAP1+PTX组行为学与LV-GFP组和Control对照组相比,癫痫发作严重程度和易感性无明显统计学意义（*P>0.05）。4.LV-HAP1 组 GABAAR β 2/3膜蛋白较 LV-GFP 组和 Control 对照组升高（*P<0.05）,总蛋白保持不变（*P>0.05）;HAP1-siRNA组GABAARβ 2/3膜蛋白较 Scr-siRNA 组和 Control 组降低（*P<0.05）,总蛋白保持不变（*P>0.05）。5.LV-HAP1组HAP1与GABAAR β 2/3相互作用程度较LV-GFP和Control 对照组增加（*P<0.05）;HAP1-siRNA 组 HAP1 与 GABAAR β 2/3相互作用程度较Scr-siRNA和Control对照组降低（*P<0.05）。6.LV-HAP1组mIPSC的幅值较LV-GFP组和Control组升高（*P<0.05）,频率不变（*P>0.05）;HAP1-siRNA 组 mIPSC 的幅值较Scr-siRNA 组和 Control 组降低（*P<0.05）,频率不变（*P>0.05）。7.LV-HAP1+PTX 组 mIPSC 的幅值与 LV-GFP 组和 Control组相比,mIPSC的幅值变化无明显统计学意义（*P>0.05）。结论:1.HAP1通过调节GABAAR参与癫痫发作。2.HAP1通过影响细胞膜上GABAAR β 2/3的数量,继而影响突触后抑制性神经递质传递,参与癫痫发作。