褐飞虱鞘脂质代谢酶microRNA的鉴定及其功能研究

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褐飞虱Nilaparvata lugens Stal是水稻重要害虫,主要取食水稻韧皮部,造成叶片叶绿素减少,根部腐烂,植株发黄形成“虱烧”,稻飞虱还能传播多种水稻病毒,不仅造成水稻产量损失,更危害生态环境的健康持续发展。MicroRNA(miRNA)是新近发现并引起广泛关注的一类非编码小RNA分子,能调控靶基因,引起靶基因的翻译抑制或mRNA降解,通过本研究我们鉴定了十种miRNAs,并对其中两条进行了相关的功能研究。1.通过Stem-loop RT-PCR验证miR-279、miR-106-5p、miR-162-3p、 miR-184-3p、miR-20-5p、miR-222-3p、miR-226-3p、miR-30-5p、miR-33-5p、 mir-60-5p十种miRNA,检测其分别在褐飞虱各个时期的表达量。2.用miRNA功能分析工具miR antagomir和miR agomir对miR-279和miR-184-3p进行抑制和过表达。并对预测到的靶基因SMS和SMPD4的进行检测。结果表明miR-279能调控SMS的转录水平。而miR-184-3p对SMPD4的转录没有影响。3.用HPLC-MS测定经miR antagomir和miR agomir处理后的褐飞虱体内鞘脂质组分和含量。发现经antagomir-279或agomir-184-3p处理后,褐飞虱体内鞘磷脂、神经酰胺和其他几种鞘脂质的含量升高,褐飞虱体重下降。经agomir-279或antagomir-184-3p处理后,褐飞虱体内鞘磷脂、神经酰胺和其他几种鞘脂质的含量降低,褐飞虱体重无明显变化。4.本文通过直接的证据表明miR-279能调控SMS的转录水平,间接的证据表明miR-279能调控SMS的翻译水平,因而SMS是miR-279的靶基因。而未直接证实SMPD4是miR-184-3p的靶基因,但SMPD4的翻译可能受到miR-184-3p的调控。
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