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胃癌在中国的发病率仅次于肺癌和乳腺癌，所导致的死亡占所有恶性肿瘤的14.71%。胃癌的侵袭和转移能力强是导致其预后差的重要原因，因而对胃癌侵袭转移具体机制的深入探索对于胃癌的防治具有重要的意义。ADAMTS1作为基质金属蛋白酶家族的成员，近年来在肿瘤领域中受到了重视，但对于肿瘤的发生、发展以及侵袭转移所起的作用存在较大的争议，在胃癌中究竟扮演怎样的角色还不得而知。本研究从组织和细胞水平明确了ADAMTS1在胃癌中的表达情况，并在此基础上对胃癌细胞株ADAMTS1的表达进行干扰，观察ADAMTS1的变化对于胃癌细胞迁移、侵袭、成瘤能力和血管形成能力的影响。并从EMT的角度探讨其影响胃癌侵袭转移的可能机制。通过本课题的研究，对ADAMTS1在胃癌中的表达情况及所发挥的作用有了更明晰的认识，就其影响胃癌侵袭转移的机制进行了初步的探讨。 第一部分：ADAMTS1在胃癌中的表达及其与临床病理参数和预后的关系 目的： 研究ADAMTS1在胃癌中的表达情况及其与临床病理参数的关系，初步探讨ADAMTS1在胃癌中所发挥的作用。 方法： 在成功构建的含有人胃癌组织和癌旁胃粘膜组织的组织芯片基础上采用免疫组化的方法进行染色；利用新鲜胃癌组织和癌旁胃粘膜组织，采用Western Blot的方法观察ADAMTS1在蛋白水平的表达。结合临床病理参数进行分析，明确ADAMTS1在胃癌中的表达情况及其与临床病理参数和预后的关系，初步探讨ADAMTS1在胃癌的侵袭和转移中的意义。 结果： （1）ADAMTS1在胃癌组织中的高表达率为21.0%（55/262），而在癌旁胃粘膜组织中的高表达率为30.9%（81/262），两者之间的差别具有统计学意义（P=0.013）。 （2）ADAMTS1在胃癌组织中的高表达与肿瘤的TNM分期相关。在Ⅰ/Ⅱ期胃癌中的高表达率为27.3%，在III/IV期胃癌中的高表达率为16.4%。与其他临床病理参数无关。 （3）ADAMTS1低表达组与高表达组的中位生存时间分别为42.54个月和34.42个月，差异具有统计学意义（P=0.002）。 （4）Cox多因素回归后发现浸润深度、淋巴结转移情况、TNM分期以及ADAMTS1的表达与预后相关。 结论： ADAMTS1在胃癌中的表达低于癌旁胃粘膜组织，肿瘤分期越晚，其表达越低。在肿瘤中的高表达与预后差相关。 第二部分：ADAMTS1高表达胃癌细胞株的筛选及RNA干扰 目的： 筛选出ADAMTS1高表达的胃癌细胞株，并对筛选出的细胞株进行RNA干扰，观察干扰的效率。 方法： 选取人胃癌细胞株MKN28、N87、SGC-7901、BGC-823、MKN-45和HCG-27，永生化人胃粘膜细胞株GES1，利用Western Blot的方法筛选出ADAMTS1高表达和低表达的细胞株；选取高表达的细胞株，构建RNA干扰质粒，采用慢病毒转染的的方法下调ADAMTS1的表达并检测干扰的效率。 结果： （1）永生化人胃粘膜细胞GES-1与低分化的胃癌细胞株MKN-45中ADAMTS1蛋白表达水平高，而其余的细胞株中ADAMTS1的蛋白表达水平低。 （2）利用慢病毒载体系统(Tronolab)成功构建了RNA干扰序列，转染MKN-45细胞后ADAMTS1在mRNA水平和蛋白水平均受到了明显的抑制。 结论： MKN-45细胞株高表达ADAMTS1蛋白，经RNA干扰后其高表达明显受到抑制，可以作为后续观察ADAMTS1对细胞功能影响的细胞株。 第三部分：ADAMTS1对胃癌细胞株的迁移、侵袭、成瘤及血管形成的影响及其机制探讨 目的： 观察不同ADAMTS1表达水平的胃癌细胞的迁移、侵袭、成瘤及血管形成能力的差别，并从EMT的角度探讨其影响胃癌细胞功能的机制。 方法： 以MKN-45细胞及采用RNA干扰后的MKN-45细胞为研究对象，使用Transwell小室的方法观察不同ADAMTS1水平胃癌细胞的迁移和侵袭能力，进行裸鼠成瘤实验观察成瘤能力及成瘤后MVD的差异，使用血管形成试验观察对于血管形成的影响；使用VEGF单抗与转染后细胞共培养，观察加入VEGF后对细胞迁移、侵袭和血管形成能力的影响；使用Western Blot的方法检测EMT相关蛋白，观察ADAMTS1表达对于细胞EMT的影响，并探讨ADAMTS1影响EMT的可能机制。 结果： （1）ADAMTS1表达降低后VEGF的表达相应的升高，同时伴有pVEGFR2的升高。 （2）ADAMTS1表达降低后胃癌细胞引起的血管生成明显增加，而加入VEGF单抗后其血管形成能力受到了明显的抑制，甚至低于野生组的胃癌细胞。裸鼠体内成瘤后ADAMTS1表达下降组的MVD升高。 （3）ADAMTS1的表达降低后胃癌细胞的迁移能力明显增强，加入VEGF单抗后增强的迁移能力受到了部分的抑制； （4）ADAMTS1表达降低后胃癌细胞的侵袭能力也有明显的增强，加入VEGF单抗后增强的侵袭能力也受到了部分的抑制； （5）ADAMTS1表达降低后胃癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力明显增强； （6）ADAMTS1的表达降低后E-cadherin表达降低，而Vimentin表达升高，促进了EMT的发生； （7）ADAMTS1可能通过抑制AKT的磷酸化而降低SNAIL的表达，从而发挥抑制EMT的作用。 结论： ADAMTS1在胃癌中发挥着抑制肿瘤迁移、侵袭和血管生成的作用，ADAMTS1表达降低所引起的迁移和侵袭能力增强可被VEGF单抗部分拮抗，血管形成能力增强可被VEGF单抗完全拮抗。ADAMTS1还可抑制胃癌细胞的EMT，其机制可能与ADAMTS1抑制AKT的磷酸化和SNAIL的表达相关。