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目的 (1)通过小鼠囊胚冷冻实验,探讨不同的冷冻方法对小鼠囊胚冷冻效果的影响;通过小鼠囊胚的玻璃化冷冻实验,探讨用半麦管为载体,冷冻液中添加高浓度的血清对提高玻璃化冷冻效果的价值;观察小鼠囊胚玻璃化冷冻前用激光行辅助皱缩对囊胚冻融效果的影响;观察小鼠囊胚玻璃化冻融后对囊胚发育能力及着床能力的影响;(2)通过人囊胚的冷冻实验,比较不同的冷冻方法对人囊胚冻存效果的影响;通过透射电镜对冻融后人囊胚超微结构的观察,了解冻融过程对人囊胚超微结构的影响,为以后人类辅助生殖技术中冷冻方法的改进提供实验依据。 方法 (1)用清洁级成年健康ICR小白鼠,雌鼠90只,雄鼠30只为实验对象,获取小鼠囊胚,慢速程序冷冻或用半麦管、平皿为载体行玻璃化冷冻,冻融后的鼠囊胚做体内移植,观察产仔情况;观察激光辅助皱缩对扩张期鼠囊胚玻璃化冷冻的影响;(2)获取体外受精-胚胎移植患者多精或质量差胚胎,继续培养使其发育成囊胚,随机分成玻璃化冷冻组和慢速程序冷冻组,观察不同冷冻方法对人囊胚冷冻效果的影响,另获取优质囊胚18枚,随机分为新鲜囊胚对照组、慢速冻融组和玻璃化冻融组,每组选取3枚胚胎固定切片,电镜观察冻融对人囊胚超微结构的影响。 结果 1.半麦管法与平皿-微滴法相比,两组胚胎解冻后囊胚回收率分别是半麦管组94.7%,平皿组95.5%;存活率半麦管组60.6%,平皿组57.8%;孵出率半麦管组37.2%,平皿组37.8%。两组比较差异无显著性(P>0.05);半麦管玻璃化冷冻方法与慢速程序冷冻方法相比,胚胎回收率分别为:半麦管组94.7%,程序组100%;胚胎存活率半麦管组60.6%,程序组54.3%;囊胚孵出率:半麦管组37.2%,程序组35.5%。两组相比,差异无显著性(P>0.05);冷冻保护液中添加高浓度