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目的: 含SAM指向结构域的ETS转录因子(SAM-pointed domain-containing ETS transcription factor，SPDEF)是E26转化特异性(E26transformation specific，ETS)家族中在上皮细胞特异性表达的转录因子，其通过高亲和力序列GGAT结合靶基因。已有研究表明SPDEF参与了乳腺癌、前列腺癌和结肠癌等肿瘤的发生，并具有靶向调控叉头盒蛋白M1(Forkhead Box M1，FoxM1)启动子活性的潜能。FoxM1已被证明在胃癌中高表达，并且是胃癌发生发展中的一个关键转录因子。因此本研究重点探讨SPDEF在胃癌发生中的作用及对FoxM1的调控机制在其中的意义。 方法: 1.在组织水平，采用QRT-PCR和免疫组织化学(IHC)等方法分析22对人体胃癌组织及癌旁正常组织标本中SPDEF和FoxM1表达情况，同时利用组织芯片进一步检测人体胃癌组织标本中SPDEF的表达，初步探讨SPDEF在胃癌发生中的作用及与FoxM1的相关性。 2.在细胞分子水平，通过SPDEF特异小干扰RNA(siRNA)或特异高表达质粒转染胃黏膜上皮细胞来源的胃癌细胞系，利用QRT-PCR和蛋白质印迹法分别从mRNA水平和蛋白水平来检测其对FoxM1基因表达的影响。通过克隆形成实验明确SPDEF在胃癌细胞增殖中的生物学作用。与此同时，通过FoxM1特异小干扰RNA(siRNA)或特异高表达质粒处理胃癌细胞系，利用QRT-PCR和蛋白质印迹法检测其对SPDEF基因表达是否也有调控作用。利用回复实验验证FoxM1在SPDEF诱导的胃癌细胞增殖中的必要性。通过双荧光素酶报告基因测定法测定SPDEF对FoxM1启动子活性的影响以及FoxM1对SPDEF的正反馈调控机制。 3.体内实验中，使用裸鼠动物模型来进一步验证抑制SPDEF对胃癌细胞系BGC-823成瘤能力的影响，包括肿瘤的形成和体积变化。同时通过免疫组化和QRT-PCR法明确在此过程中SPDEF对FoxM1表达的调控。与此同时，也验证FoxM1对SPDEF的反馈调控及对肿瘤形成的影响。 4.统计学分析:结果数据以均数±标准误((x)±SEM)表示，采用单因素方差分析或Students t-检验进行分析。 结果: 1.与正常组织相比，胃癌组织中SPDEF信使RNA(mRNA)和蛋白质水平表达均显著升高，并且SPDEF和FoxM1的表达呈正相关性。在多种胃黏膜上皮细胞来源的胃癌细胞系中也均检测到SPDEF的稳定表达。 2.在转染SPDEF过表达质粒的细胞中，过表达的SPDEF能促进胃癌细胞增殖，在转染SPDEF小干扰的胃癌细胞中，细胞增殖收到抑制。SPDEF可调控FoxM1的mRNA和蛋白水平的表达。FoxM1的过度表达和抑制也可分别上调和下调SPDEFmRNA和蛋白水平的表达。回复实验证实，即使用特异siRNA抑制SPDEF表达，FoxM1的过表达也能至少部分恢复SPDEF的表达和细胞系的增殖。双荧光素酶活性测定结果显示，SPDEF与FoxM1的启动子区结合并活化FoxM1的表达，而FoxM1也可与SPDEF的启动子结合以影响其表达。 3.动物实验模型检测结果显示抑制SPDEF和FoxM1的表达都减缓了肿瘤的生长。在这个过程中，两个基因在mRNA和蛋白质水平上相互作用。 结论: SPDEF在胃癌中过表达，可与FoxM1形成正调控环促进胃癌发生。该研究明确了SPDEF在胃癌发生中的作用机制，并进一步确定了FoxM1在胃癌发生中的重要作用，可为相关疾病的诊断治疗和药物靶点筛选提供一定的理论依据。