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1型糖尿病（type1diabetes mellitus，T1DM）是一种选择性破坏胰岛β细胞的自身免疫性疾病，近年来其发病率不断上升。虽然已经有很多研究证明自身反应性T淋巴细胞在T1DM的发病机制中起着很重要的作用，但是在T1DM时胰岛β细胞的浸润除了T淋巴细胞还有B淋巴细胞以及其他细胞。近年来人们逐渐认识到B淋巴细胞在T1DM发展中具有重要作用，例如研究者用多种方法清除B细胞可以减轻或延缓T1DM的发生和发展。B细胞在T1DM中的抗原提呈作用已被证实，但是关于天然免疫B细胞在T1DM中作用尚不清楚。本课题组前期通过未免疫小鼠B细胞与骨髓瘤细胞融合筛选得到4株天然多反应性IgM杂交瘤；克隆其中一株天然抗体可变区基因，成功构建了可以表达天然自身抗体的3B4转基因小鼠。本研究通过3B4转基因（3B4Tg+）小鼠和非肥胖糖尿病（non-obese diabetic mice，NOD）小鼠杂交并回交得到3B4转基因的NOD背景小鼠（3B4Tg+/NOD），以此为平台对高表达3B4自身抗体的天然免疫B细胞与小鼠糖代谢关系进行了初步研究。目的明确3B4天然自身抗体对胰岛素的识别，观察3B4转基因小鼠对不致病剂量链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导的反应及胰腺组织学状态；初步探讨高表达胰岛素反应性天然自身抗体对野生及NOD小鼠糖耐量的影响。方法1.小鼠剪尾，提取DNA，运用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）鉴定3B4转基因的存在。2.用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbnent assay，ELISA）检测血清3B4天然自身抗体与胰岛素及其他自身抗原的识别情况，与阳性对照actin比较3B4天然自身抗体与胰岛素亲和力；不致病剂量STZ诱导同窝3B4Tg+和3B4阴性（3B4Tg-）小鼠，监测血糖并进行口服葡萄糖耐量试验（oral glucose tolerance test，OGTT）；石蜡切片苏木精伊红（hematein eosin，HE）染色观察3B4Tg+小鼠胰腺组织。3.对不同鼠龄野生（wild type，WT）、NOD、3B4Tg+/NOD和3B4Tg+小鼠进行口服葡萄糖耐量试验；收集血清用ELISA检测血清总IgM及抗胰岛素反应性IgM水平；获取小鼠脾细胞和腹腔细胞，荧光抗体染色后用流式细胞仪分析不同基因型小鼠B细胞发育情况。结果1.3B4Tg+和3B4Tg+/NOD小鼠3B4基因传代稳定。2.3B4天然自身抗体可以识别包括胰岛素在内的多种抗原，且对胰岛素有较高的亲和力；不致病剂量STZ诱导3B4Tg+和3B4Tg-小鼠均未发病，但3B4Tg+小鼠诱导后其OGTT试验30min血糖明显高于3B4Tg-小鼠；HE染色后可在3B4Tg+小鼠胰岛观察到单个核的细胞浸润。3.10周、14周OGTT时，3B4Tg+/NOD、3B4Tg+小鼠血糖较WT对照组小鼠均显著升高；NOD、3B4Tg+/NOD和3B4Tg+小鼠血清中总IgM水平高于WT小鼠，且3B4Tg+/NOD和3B4Tg+小鼠胰岛素反应性抗体高于NOD小鼠；与WT组小鼠相比，NOD、3B4Tg+/NOD和3B4Tg+小鼠外周成熟B细胞明显向腹腔B1a及脾边缘带B（marginal zone B cell，MZB）细胞分化。结论3B4天然自身抗体对胰岛素有较高的亲和力，3B4Tg+小鼠胰岛中单个核的细胞浸润可能导致了对STZ诱导的较高敏感性；天然自身抗体3B4转基因小鼠中天然免疫B细胞可以向特定亚群发育分化成熟并分泌自身抗体，高表达天然自身抗体小鼠无论是否具有NOD基因背景均可出现糖耐量异常，提示天然免疫失耐受可能是1型糖尿病糖代谢异常的发病因素之一。