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目的：采用细菌内同源重组法构建含人内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-CMV-hEn。方法：将hEn基因自pCA13-hEn质粒中酶切下来，亚克隆至腺病毒穿梭质粒中，形成转移质粒pAdtrack-CMV-hEn，并用PmeⅠ线性化后与腺病毒基因组质粒pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183，抽提重组体腺病毒基因组质粒DNA，PacⅠ酶切后在293细胞中包装成腺病毒颗粒。测定病毒滴度后，采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定，并采用RT-PCR检测感染腺病毒的胃癌细胞内有无hEn mRNA的转录。结果：由pAdtrack-CMV-hEn和pAdeasy共转化大肠杆菌BJ5183后，可得到阳性重组体细菌克隆，包装完成的腺病毒经PCR检测表明已含有hEn基因。纯化所得腺病毒滴度约为2.4×1011 PFU/l。 RT-PCR证实在感染重组体腺病毒Ad-CMV-hEn的细胞中有相应mRNA的转录。结论：细菌内同源重组法是一种高效、简便、快捷的重组体腺病毒载体制备方法。所构建的Ad-CMV-hEn感染细胞后能有效转录相应的mRNA。