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目的临床研究表明食物不耐受（FI）与孤独谱系障碍（ASD）、智力发育障碍（IDD）等神经发育障碍性疾病存在相关性,并有研究证实中枢神经系统（CNS）肥大细胞（MC）作为脑内超过50%的组胺及20%～40%的5-羟色胺（5-HT）的来源以及脑中唯一可将肿瘤坏死因子-α（TNF-α）暂时储存在胞质内的细胞,当被激活发生脱颗粒时,其释放的组胺、5-HT、类胰蛋白酶、TNF-α、白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6等神经介质与炎性因子可参与CNS炎症反应引起神经系统损伤。而海马区作为工作记忆形成的重要区域,有研究表明海马损伤在ASD、IDD等神经发育障碍性疾病中起重要作用,CNS炎症反应引起海马损伤被推测可能参与神经发育障碍性疾病的形成。鉴于3岁以上神经发育障碍性疾病患儿中鸡蛋不耐受阳性率最高,为进一步了解不耐受食物分子与相应Ig G合成的免疫复合物（IC）可否通过MC引起CNS免疫炎症反应造成海马神经元损伤,本实验通过构建卵清蛋白（Ova）不耐受的细胞模型,探究Ova不耐受抗体对神经细胞的影响及相关机制,为FI介导的神经发育障碍性疾病临床干预提供理论依据。方法采用细胞离体实验,以Ova作为抗原,通过Ova及不同浓度抗Ova Ig G1抗体（单克隆编号:6C8;0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0及40.0μg/ml）体外合成Ova-6C8 IC,激活小鼠肥大细胞瘤细胞（MC）构建Ova不耐受细胞模型,并设MC空白对照组、MC阳性对照组（予脂多糖处理）。提取上述各组MC细胞上清液干预小鼠海马神经元（HN）,并设置HN无细胞组（无HN细胞及MC细胞上清液）、HN无处理组（无MC细胞上清液）。使用细胞计数试剂盒（CCK）法检测HN细胞活力,并采用细胞免疫荧光（染料:DAPI）对HN进行染色,在倒置荧光显微镜下观察HN染色情况,并使用图像专家+（IPP）软件对存活HN细胞进行计数。通过酶联免疫吸附检测（ELISA）法检测MC细胞上清液组胺、5-HT及TNF-α浓度。所有实验数据通过SPSS软件采用单因素方差分析（one-way ANOVA）比较组间差异,采用Dunnett’s t检验比较实验各组与空白对照组间的差异,采用回归分析评估处理MC的IC的浓度与HN细胞活力之间、处理MC的IC的浓度与MC细胞上清液TNF-α浓度之间以及MC细胞上清液TNF-α浓度与HN细胞活力之间的相关性。结果实验结果显示:1)接受不同浓度Ova-6C8 IC干预的MC细胞上清液处理HN后,实验各组间HN细胞活力(P=2.89×10-4)与存活细胞数(P=2.04×10-12)存在显著的统计学差异,其中HN阳性对照组(P=1.56×10-3)、HN组1(P=3.37×10-2)、HN组3(P=2.92×10-2)、HN组4(P=2.26×10-3)的细胞活力与空白对照组比较存在统计学差异,回归分析结果提示HN细胞活力与处理MC的IC浓度呈线性关系(R~2=0.893,P=4.00×10-4),且呈正相关,HN组2～4亚组(PHN组2=2.65×10-2,PHN组3=2.30×10-4,PHN组4=1.63×10-8)的存活细胞数与HN空白对照组比较存在统计学差异;2)当MC接受不同浓度Ova-6C8 IC处理24h后,包含MC阳性对照组在内的实验各组细胞上清液组胺(P=1.47×10-1)、5-HT(P=2.88×10-1)浓度与MC空白对照组比较均无明显统计学差异,而实验各组间TNF-α浓度存在统计学差异(P=1.70×10-5),其中MC阳性对照组(P=3.41×10-2)、MC组1(P=6.01×10-6)、组2(P=1.24×10-3)、组7(P=2.68×10-5)亚组上清液TNF-α浓度与MC空白对照组存在统计学差异,回归分析结果提示MC细胞上清液TNF-α浓度与IC浓度呈现倒钟型变化关系(R~2=0.694,P=1.50×10-3),即根据回归分析,当6C8浓度在0.625μg/ml～18.98μg/ml范围内时,TNF-α浓度与IC浓度呈负相关,当6C8浓度在18.98～40.00μg/ml范围内时,TNF-α浓度与IC浓度呈正相关;3)回归分析结果提示,MC细胞上清液TNF-α浓度与HN细胞活力同样存在倒钟型变化关系(R~2=0.957,P=3.73×10-4),而非线性关系(R~2=0.301,P=1.59×10-1),即当MC细胞上清液中TNF-α浓度在349.06～1352.48pg/ml范围内,HN细胞活力与TNF-α浓度呈负相关;当上清液中TNF-α浓度在1352.48～2460.75pg/ml范围内时,细胞活力与TNF-α浓度呈正相关,其中,当MC细胞上清液中TNF-α浓度在672.72～2032.23pg/ml范围内,HN细胞活力低于HN空白对照组（98.29%±7.62%）。结论本研究发现:1)接受不同浓度IC干预的MC细胞上清液处理小鼠HN后,HN细胞活力及存活细胞数较空白对照组有所变化;2)当小鼠MC接受不同浓度Ova-6C8 IC处理24h后,其组胺与5-HT分泌无明显变化,而其TNF-α分泌水平随IC浓度变化呈倒钟型变化趋势;3)接受MC细胞上清液干预的HN的细胞活力与MC细胞上清液内TNF-α分泌水平存在倒钟形变化趋势。以上发现提示,在离体情况下,食物不耐受可通过激活MC合成和分泌TNF-α等炎症因子而影响HN活性。