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研究背景:特发性炎性肌病(idiopathic inflamnmtorymyodtis,IIM )是一组自身免疫性疾病,其主要包括多发性肌炎(Polymyositis, PM)、皮肌炎(Dermatomyositis, DM)和包涵体肌炎。尽管许多证据表现IIM是由免疫介导所致,但是更具体的发病机制仍不是非常明了。研究表明,核苷酸结合寡聚化结构域受体蛋白3 (NOD-like receptor protein 3,NLRP3)与接头蛋白(凋亡相关的含有CARD区的斑片样蛋白,apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)和效应蛋白(半胱天冬酶-1,Caspase-1)组成的多蛋白复合体(NLRP3炎性小体)参与固有免疫应答,但NLRP3炎性小体是否与PM/DM患者肌肉组织中肌纤维变性、坏死相关,以及NLRP3在IIM发病过程中的主要作用,仍需进一步验证。高迁移率族蛋白1 (high mobility group box 1,HMGB1)作为一种重要的炎性物质在肺间质纤维化的动物模型中证实受caspase-l的调控与其下游物质IL-18和IL-1 β共同参与NLRP3炎性小体通路的致病过程,但在IIM中并无相关研究。蛋白组学广泛用于疾病研究,以寻找可能的某个疾病的生物标志物,为该疾病提供最佳的诊断金标准。许多相关研究提示IIM患者不论在血液还是在肌肉组织,极有可能存在的特殊相关的蛋白性生物标志物,且人们仍在努力探讨中。非定量蛋白质组学技术中的 SWATH-MS (Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions - Mass Spectrometry)是蛋白组学技术中比较稳定且应用较广的技术,具高通量等特点。在医学领域,SWATH-MS在临床诊断、发病机制及药物研发等方面有初步的应用成果。为此,采用SWATH-MS直接研究IIM患者病变的肌肉组织的蛋白组学非常有实际意义。研究目的:1、观察PM/DM患者及自身免疫性肌炎动物模型肌肉组织的NLRP3及HMGB1表达。2、通过免疫干预自身免疫性肌炎动物模型,观察NLRP3及HMGB1表达,以了解其治疗作用。3、通过PM/DM患者肌肉蛋白组学研究,以寻找可能的特发性炎性肌病的特异性蛋白标志物。材料与方法:1、选用12只BALB/c小鼠,采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白弗氏佐剂混悬液免疫方法制作本模型,观察动物的临床表现、血清CK含量及肌肉的病理变化。2、将18只BALB/c小鼠分为EAM治疗组、EAM组和对照组,采用免疫组织化学方法观察给予BAY 11-7082治疗后的动物模型临床表现和肌肉组织NLRP3与HMGB1的表达。3、采用免疫组织化学染色方法观察6例PM、10例DM和10例肌活检正常者(对照组)的肌肉组织NLRP3及HMGB1的表达。4、采用SWATH-MS技术检测DM、PM、免疫坏死性肌病和假肥大型肌营养不良(均各为3例)患者的肌肉组织蛋白组学,并将其结果通过网站对差异蛋白进行分析比较。研究结果:1、EAM组小鼠的临床表现明显,血清CK含量升高,病理为典型肌炎改变,提示本模型为理想的EAM动物模型。2、与EAM组和对照组比较,EAM治疗组临床表现显著好转(1.73±0.1 vs 1.55±0.1,P<0.01),四肢肌力显著改善(11.0±0.7g/gvs8.1±0.2g/gvs13.4±0.7g/g,P<0.01),肌肉组织NLRP3和HMGB1的mRNA及其蛋白表达均显著下降(P<0.01)。3、与对照组比较,PM患者肌肉组织NLRP3表达均为阳性,DM患者肌肉组织,NLRP3的表达阳性率为80%; PM患者肌肉组织HMGB1均表达阳性,DM患者肌肉组织HMGB1的表达阳性率为30%。4、与DMD组比较,PM组检测出的差异蛋白有302种,DM组有484种;与NM组比较,PM组检测出的差异蛋白有176种,DM组有261种。为寻找与炎性免疫性相关的差异蛋白,进一步分析发现DM组有6种,PM组有10种与炎症相关。其中DM组的热休克蛋白90-β和双链糖蛋白与NLRP3炎性小体反应途径相关。PM组中细胞凋亡相关的含有CARD区的斑点样蛋白与NLRP3炎性小体反应途径相关。研究结论:1、NLRP3及HMGB1共同参与特发性炎性肌病的发病过程。2、通过干预NLRP3及HMGB1的表达,可能有效治疗效果。3、特发性炎性肌病可能存在与炎症相关的生物标志蛋白。