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背景：CD25是IL-2R的α链，作为IL-2R的组成部分，参与IL-2R介导的信号通路，发挥相应生理功能。先前的研究表明，IL-2/IL-2R/CD25介导的信号通路能诱导角膜移植排斥反应的发生，是导致角膜移植手术失败的主要原因。国内外已有几篇文献报道，应用 CD25的单克隆抗体可以抑制角膜移植排斥反应的发生，有效延长植片的生存时间。本课题组先前已用慢病毒载体接连CD25siRNA质粒转染大鼠角膜移植模型，结果显示治疗组能有效延长角膜植片的存活时间。然而，应用纳米载体接连CD25siRNA转染角膜移植排斥反应的文献，国内外至今未见报道，其治疗的效果、副作用及相应的机制尚不清楚。 本实验共包括两部分。 目的： 一、探讨纳米载体EntransterTM-CD25siRNA、脂质体-CD25siRNA对正常成年SD大鼠眼角膜的转染率和转染毒性，筛选最佳转染试剂及转染时间点。 二、观察 EntransterTM-CD25siRNA基因转染对大鼠穿透性角膜移植排斥反应的治疗作用、副反应及相应的机制。 方法: 一、采用随机数字表法将80只正常成年SPF级SD大鼠平均分为四组，即EntransterTM-CD25siRNA复合物组（EntransterTM组）、脂质体- CD25siRNA复合物组（脂质体组）、CD25siRNA组（siRNA组）和生理盐水组（对照组）。于给予点眼试剂后12h,24h,3d,7d在裂隙灯下观察大鼠眼球情况，行荧光显微镜检测四种转染试剂的转染率，行 HE染色、TUNEL染色检测转染试剂对角膜的毒性，行 CD11b检测角膜对转染试剂的免疫应答。 二、构建Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型，采用单纯随机抽样方法将模型平均分为对照组、EntransterTM-反义CD25siRNA转染组和EntransterTM-CD25siRNA转染组。术后每日对植片行临床评分并分别于术后3、7、14、21d行HE染色、免疫组化、Western Blotting和qRT-PCR检测植片中 CD25表达及分布。行免疫组化检测术后14天 IL-10、TGF-β、INF-γ、IL-1β、TNF-α和FOXP3的表达。 结果: 一、荧光显微镜检测结果显示EntransterTM组荧光表达数量及强度高于脂质体组，siRNA组荧光表达早但至24h已完全衰减，对照组荧光阴性。HE染色、TUNEL染色、CD11b检测结果显示脂质体转染试剂引起角膜的炎性反应、角膜细胞凋亡和免疫应答明显强于其余三组。 二、在Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型中，裂隙灯和HE检查显示CD25siRNA转染组植片组织形态显著优于其余两组；生存时间较其余两组显著延长（p<0.05），相对应地，Western blot和qRT-PCR显示该组CD25蛋白表达和CD25mRNA水平均低于其余两组（p<0.05）。免疫组化显示该组于术后第14天 IL-10和 TGF-β的表达高于其余两组；而INF-γ、IL-1β和 TNF-α的表达低于其余两组；FOXP3的水平在三组间无显著差异。 结论: 一、纳米EntransterTM转染试剂接连CD25siRNA转染正常SD大鼠眼角膜，具有转染效率高、低毒性、不引起角膜免疫反应的特点，是角膜基因治疗较理想的纳米转染试剂。 二、EntransterTM-CD25siRNA基因治疗能有效抑制角膜植片中CD25表达，从而在一定程度上抑制角膜移植排斥反应的发生，延长角膜植片的存活时间，并维持角膜植片较好的形态学结构。其机制可能在于通过上调 IL-10和 TGF-β的表达，下调 INF-γ、IL-1β和TNF-α的表达来完成。