海风藤提取物对Aβ寡聚体诱导小胶质细胞释放IL-1β、IL-6影响的研究

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目的:研究制备和鉴定Aβ寡聚体的方法,探讨Aβ寡聚体和纤丝状Aβ激活小胶质细胞引起炎症反应,并探讨海风藤提取物对该炎症反应的抑制作用。方法:1.用HFIP处理冻干粉状Aβ42使其单体化,将HFIP在生物安全柜中完全蒸发掉后用DMSO溶解Aβ42,然后将DMSO-Aβ42溶液重悬于Ham’s F-12培养液,转移到4。C的条件下孵育24 h,Aβ25-35用相似的方法制备寡聚体,将制备得到的寡聚体于透射电镜下观察。2.小胶质细胞分离纯化鉴定后,将培养的小胶质细胞随机分为7组,每组设5个平行孔,对其用Aβ25-35寡聚体或/和海风藤提取物进行干预:①空白对照组;②Aβ25-35寡聚体组;③Aβ25-35寡聚体+海风藤提取物组;④A p 25-35寡聚体+DMSO组;⑤纤丝状Aβ25-35组;⑥纤丝状Aβ25-35+海风藤提取物组;⑦纤丝状Aβ25-35+DMSO组。干预48小时后,收集上清液,用ELISA试剂盒测上清液中IL-1β和IL-6的水平。结果:1.Aβ42寡聚体和Aβ25-35寡聚体4℃孵育1h后均观察到了寡聚体,直径分别在12-25nm.10-20nm;Aβ42寡聚体4℃孵育24h、Aβ25-35寡聚体4℃孵育48h后观察发现寡聚体的直径与孵育1h时没有明显的变化,没有纤丝状物质形成。2.与空白对照组相比,Aβ寡聚体、纤丝状Aβ刺激小胶质细胞48h后,其上清液中IL-1β、IL-6的水平明显增加(P<0.01);Aβ寡聚体组和纤丝状Aβ组相比,Aβ寡聚体组的上清液中IL-1β、IL-6的水平明显高于纤丝状Aβ组(P<0.01);Aβ寡聚体组的上清液中IL-1β、IL-6的水平明显高于Aβ寡聚体+海风藤提取物组(P<0.01);纤丝状Aβ组的上清液中IL-1β的水平明显高于纤丝状Aβ+海风藤提取物组(P<0.01);纤丝状Aβ组的上清液中IL-6的水平高于纤丝状Aβ+海风藤提取物组(P<0.05)。结论:1.用此方法制备出了Aβ42寡聚体和Aβ25-35寡聚体,直径分别在12-25nm、10-20nm。2.Aβ寡聚体较纤丝状Aβ能更强的激活小胶质细胞释放IL-1β和IL-6;海风藤提取物能明显抑制Aβ寡聚体和纤丝状Aβ诱导小胶质细胞激活释放IL-1β和IL-6。
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