论文部分内容阅读
目的：研究WDR26在系统性硬化症(systemic sclerosis, SSc)患者及正常人皮肤成纤维细胞中的表达,以及WDR26在转化生长因子-β(transforming growth factor-β, TGF-β)刺激的皮肤成纤维细胞中的表达及作用。方法：①采用Western-blot检测SSc患者及正常人皮肤成纤维细胞中WDR26蛋白的表达差异。②以不同浓度TGF-β(0,0.1,1.0,5.0,10.0ng/ml)刺激SSc患者和正常人皮肤成纤维细胞或同一浓度TGF-β(10ng/ml)刺激成纤维细胞不同时间(0,6,12,24,48小时)后,用Real-time PCR检测成纤维细胞中WDR26mRNA的表达变化,研究TGF-β对成纤维细胞中WDR26表达的影响。③在正常人成纤维细胞中过表达或低表达WDR26,分别用TGF-β(10ng/ml)刺激,Real-time PCR检测：a.成纤维细胞中细胞外基质Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、纤连蛋白(FN)mRNA的表达,研究WDR26对TGF-β诱导的成纤维细胞中细胞外基质生成的影响；b.成纤维细胞中TGF-p信号通路蛋白SMAD3mRNA的表达,对WDR26在成纤维细胞TGF-β通路中的作用机制进行初步探索。结果：①SSc患者皮肤成纤维细胞中WDR26蛋白表达较正常人增多。②TGF-β(10ng/ml)刺激48小时后,正常人成纤维细胞表达WDR26蛋白明显增高。采用不同浓度TGF-p刺激成纤维细胞或同一浓度TGF-p刺激成纤维细胞不同时间后,随着刺激浓度的增加和刺激时间的延长,SSc和正常人的成纤维细胞中WDR26mRNA的表达均呈先增高后降低的趋势；正常人成纤维细胞较SSc患者表达WDR26mRNA多,且变化的速度更快,两者的表达在48小时趋于接近。③通过在成纤维细胞中过表达或低表达WDR26,我们发现过表达WDR26可抑制TGF-p诱导的成纤维细胞中COL1A1mRNA的表达,而低表达WDR26可促进TGF-p诱导的成纤维细胞中COL1A1mRNA的表达；低表达WDR26时,成纤维细胞中SMAD3mRNA表达降低,过表达WDR26时,成纤维细胞中SMAD3mRNA的表达也降低,SMAD3mRNA的表达随着WDR26表达水平的增高呈先增高后降低的趋势。结论：①SSc患者皮肤成纤维细胞中WDR26表达较正常人增多。②TGF-p可诱导皮肤成纤维细胞中WDR26表达。③WDR26能抑制TGF-β诱导的成纤维细胞中细胞外基质COL1A1mRNA的表达,对TGF-β介导的纤维化起保护作用。