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目的:通过基因工程技术表达六个轮状病毒(rotavirus,RVs)株(Rotateq-P[8]、Rotateq-P[5]、Rotarix、RRV、LLR、P[14])的VP8*蛋白,以酶免疫分析实验(Enzyme immune assays,EIA)为基础建立的唾液结合实验及寡糖结合实验研究不同P基因型毒株VP8*蛋白与组织血型抗原(Histo-blood group antigens,HBGAs)的结合特性,为进一步研究RVs-VP8*蛋白的功能特性、HBGAs在RVs感染过程中的作用及新型RVs疫苗和防治药物的研发提供理论依据。方法:(1)从Genbank中检索RVs疫苗Rotateq、Rotarix及Rotashield相关病毒株的VP8*基因序列,并进行基因合成;(2)从RVs疫苗rotorway(罗特威)提取病毒株LLR核酸,用随机引物进行RT-PCR扩增;(3)P[14]型轮状病毒株核酸,为本实验从患儿粪便标本提取所得;(4)设计引物,通过PCR反应扩增6个病毒株的VP8*区基因序列,克隆至表达载体pET-30a;(5)测序鉴定正确的重组表达质粒pET-30a-VP8*转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,用HisTrapTMFF亲和层析柱纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western-blot鉴定;(6)通过唾液结合实验分析不同病毒株VP8*蛋白与携带不同HBGAs表型唾液的结合特性;(7)根据寡糖结合实验分析不同病毒株VP8*蛋白与合成寡糖A、B、Lea、Leb、Lex、Ley、PreⅠ、PreⅡ、H1、H2、H3的结合特性。结果:(1)成功构建了6个rvs株vp8*编码区的重组表达质粒:pet-30a-rotateq-p[8]-vp8*、pet-30a-rotateq-p[5]-vp8*、pet-30a-rotarix-vp8*、pet-30a-rrv-vp8*、pet-30a-llr-vp8*、pet-30a-p[14]-vp8*。(2)成功表达了6个rvs株的重组vp8*蛋白:his-rotateq-p[8]-vp8*、his-rotateq-p[5]-vp8*、his-rotarix-vp8*、his-rrv-vp8*、his-llr-vp8*、his-p[14]-vp8*,大小约为26kda。(3)重组蛋白rotateq-p[8]-vp8*及rotarix-vp8*可以与a、b、ab及o型分泌型唾液结合,不与非分泌型唾液结合;重组蛋白p[14]-vp8*与a、ab型唾液有明显结合,与其它表型唾液均不结合;重组蛋白his-rotateq-p[5]-vp8*、his-rrv-vp8*、his-llr-vp8*与唾液不结合。(4)重组蛋白rotateq-p[8]-vp8*及rotarix-vp8*可以与h1型hbgas结合,重组蛋白p[14]-vp8*与a型hbgas特异性结合,重组蛋白his-rotateq-p[5]-vp8*、his-rrv-vp8*、his-llr-vp8*与各型hbgas及唾液均不结合。结论:(1)本研究利用原核表达系统成功表达了不同p基因型rvs株的vp8*蛋白;(2)首次构建了唾液结合实验与寡糖结合实验用于轮状病毒vp8*蛋白与组织血型抗原的结合特性研究;(3)rvsvp8*蛋白与hbgas的结合呈现株特异性,p[8]型rvs的vp8*蛋白与h1型hbgas结合,能够与分泌型唾液结合,不与非分泌型唾液结合;p[14]型rvsvp8*蛋白特异性结合a型hbgas,能够与a型和ab型唾液结合,不与其它表型唾液结合,p[5]型rotateq-p[5]-vp8*、p[3]型His-RRV-VP8*及P[15]型His-LLR-VP8*与各型HBGAs及唾液均不结合。