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第一部分VIPR1表达对肝细胞癌临床病理特征及预后的影响目的:研究肝细胞癌组织中VIPR1的表达情况,并就VIPR1表达与临床病理特征和预后间的关系进行分析。方法:从桂林医学院获取组织芯片,其包含95例肝细胞癌组织和80例配对的癌旁组织。通过Oncomine数据分析和免疫组织化学方法研究VIPR1在肝细胞癌组织中的表达情况。采用Pearson chi-square检验分析VIPR1表达与HCC（Hepatocellular Carcinoma）患者的临床病理参数之间的关系。使用Kaplan-Meier法进行生存分析。单因素和多因素分析基于Cox回归模型。结果:VIPR1在HCC组织中的表达水平显著降低。VIPR1表达而与患者性别、年龄、肿瘤大小、有无肝硬化、TNM分期等没有显著相关性,而与组织病理分级显著相关（P=0.006）。VIPR1低表达与低生存率显著相关。Cox回归分析显示,VIPR1表达为HCC患者生存的独立影响因素。VIPR1低表达的患者死亡风险显著高于高表达患者。结论:VIPR1在肝细胞癌组织中低表达,并与患者低生存率密切相关。VIPR1有望成为肝细胞癌临床预后分析的标志物和潜在的治疗靶点。第二部分启动子区域甲基化抑制VIPR1表达目的:VIPR1在肝细胞癌组织中表达水平下降可能与DNA甲基化异常相关。本研究将关注肝细胞癌组织中VIPR1的甲基化情况,并探究甲基化修饰与VIPR1表达间的关系。方法:从广西医科大学第四附属医院（柳州市工人医院）获取10对石蜡包埋的配对肝细胞癌组织及癌旁组织。MHCC97-L和MHCC97-H细胞系购自上海复旦IBS细胞资源中心（FDCC）。SK-Hep-1和Hep3B细胞系购自中国科学院昆明动物研究所昆明细胞库。Gs-Hep G2和Huh7细胞系由广西医科大学第四附属医院外科实验室保存并传代培养。运用c Bio Portal在线分析VIPR1基因在TCGA肝细胞癌数据集中的基因突变情况。UCSC上查找VIPR1基因的Cp G岛。Meth HC数据库在线分析HCC组织中VIPR1的甲基化情况,并与VIPR1 m RNA表达水平进行相关性分析。采用焦磷酸测序技术检测肝细胞癌组织中VIPR1的甲基化水平。DNA甲基化转移酶抑制剂DAC处理肝细胞癌细胞,采用焦磷酸测序技术、q RT-PCR和Westren blot方法检测DAC处理前后VIPR1甲基化水平和表达水平变化。结果:VIPR1在HCC中的突变频率仅有1.6%,提示基因突变可能不是HCC患者体内VIPR1低表达的主要原因。VIPR1基因5’端存在一个长度为1704 bp,含有127个Cp G位点的Cp G岛,跨越转录起始位点。该Cp G岛内的7个Cp G位点（位于转录起始位点上游-423至-388 bp区）为高甲基化位点。HCC组织中VIPR1的甲基化水平显著高于癌旁组织;m RNA水平显著低于癌旁组织。VIPR1的甲基化水平与m RNA表达水平呈负相关。DNA甲基化转移酶抑制剂DAC处理能够抑制VIPR1启动子区域甲基化并提升VIPR1 m RNA和蛋白表达水平。结论:VIPR1基因突变不是肝细胞癌患者中VIPR1表达水平降低的主要原因。肝细胞癌中VIPR1基因启动子区域甲基化程度升高是造成VIPR1表达下调的一个重要原因。第三部分H3K27去乙酰化抑制VIPR1表达目的:组蛋白H3K27去乙酰化与基因转录沉默密切相关。组蛋白去乙酰化可以与DNA甲基化修饰协同调控基因表达。VIPR1在肝细胞癌组织中表达水平下降可能与H3K27去乙酰化异常相关。本研究将关注VIPR1周围的H3K27Ac的富集情况,并探究H3K27去乙酰化与VIPR1表达间的关系。方法:SK-Hep-1和Hep3B细胞系购自中国科学院昆明动物研究所昆明细胞库。Gs-Hep G2和Huh7细胞系由广西医科大学第四附属医院外科实验室保存并传代培养。通过Cistrome Data Browser在线对VIPR1启动子区域进行H3K27Ac富集分析。组蛋白去乙酰化酶（HDACs）抑制剂PBA处理肝细胞癌细胞,采用Ch IP-q PCR方法检测PBA处理前后VIPR1启动子区域H3K27Ac富集情况变化。PBA和DAC联合处理肝细胞癌细胞,采用q RT-PCR方法检测药物处理前后VIPR1 m RNA水平变化。结果:HCC细胞系Hep G2和Huh7中几乎不存在H3K27Ac富集,暗示肝细胞癌中VIPR1下调可能与H3K27去乙酰化异常相关。HDACs抑制剂PBA处理肝细胞癌细胞后能够显著增加VIPR1 m RNA表达水平。PBA和DAC联合处理比单一处理更能引起HCC细胞VIPR1 m RNA的表达水平增加。PBA处理能够增强H3K27Ac蛋白与VIPR1基因启动子区的结合,并且这一趋势随着PBA浓度的增加而加强。结论:VIPR1表达还受到H3K27去乙酰化调节。VIPR1启动子区域H3K27去乙酰化程度升高是造成VIPR1表达下调的另一重要原因。