黑龙江部分地区野生鸟类AIV和NDV感染状况的初步研究

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禽流感和新城疫是危害禽养殖业的两种主要疾病,近年来,新城疫的爆发出现新的特点,免疫失败的报道增多;禽流感不仅严重危害禽养殖业,给世界经济带来严重影响,而且危及人类生命,引起了世界各国的高度重视。野生鸟类是禽流感和新城疫的重要宿主,研究野生鸟类中这两种疾病流行情况,对于了解野生鸟类在禽流感和新城疫传播过程中的作用以及防控这两种疾病的爆发都有着重要的意义。2005年至2006年在黑龙江省部分地区采集了183只野生鸟类个体肛、咽拭子的样品,对这些样品利用无特定病原体(SPF)鸡胚传代的方法进行了对AIV及NDV的分离,并利用RT-PCR和血凝试验的方法进行检测和初步鉴定。结果表明,所采集的样品中,共分离出AIV21株,分离率为11.5%,NDV检测呈阳性的样品16株,感染率为8.7%。然后,我们参考GenBank中AIV的8个片段的相应的核甘酸序列,设计并合成了12对特异性引物,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增其中一株野鸭源AIV(A/Mallard/SanJiang/151/06(H6N2))基因组的8个基因片段,其中HA、PA、PB1、PB2这4个基因分为两段扩增。PCR产物经纯化、连接测序载体、转化感受态细胞以及重组质粒阳性鉴定后,进行序列测定。测序完成后,用生物学软件对其核甘酸序列以及推导的氨基酸序列进行分析,并将这些序列与国内外H6N2亚型的部分分离株的相应核甘酸序列以及其推导的氨基酸序列进行同源性比较和遗传进化分析。测序结果表明,所得到的AIV的8个片段均含有完整的开放阅读框架以及5′端和3′端的非编码区序列。通过NCBI的BLAST比较,该分离株起源于欧亚群系,与北海道地区流感分离株遗传关系密切,有着相似的遗传演化过程。对该病毒HA基因进行氨基酸序列分析,在其裂解位点的氨基酸序列为340PQIETR↓G346,与低致病性禽流感的HA的裂解位点相一致,且H6N2亚型到目前为止还没有高致病力毒株的报道,可以推断该分离株A/Mallard/SanJiang/151/06(H6N2)为非高致病力毒株。
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