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目的:细菌内毒素(endotoxin)广泛存在于革兰氏阴性菌及其他微生物如衣原体、立克次体等的细胞壁成分中,当细菌死亡或自溶后胞壁崩解时释放出来。其主要的化学成分是脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),包括O-特异性链、核心多糖和类脂A三部分组成,可引起发热、白细胞及中性粒细胞升高,甚至导致内毒素休克等全身反应。同时LPS又是一种免疫诱导剂,具有多种复杂的生物学活性,可激活单核巨噬细胞、淋巴细胞、粒细胞、成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞等多种靶细胞合成和分泌各种细胞因子及其他炎症介质,导致多种病理和病理生理损害。因此,关于LPS的毒性、生物学活性及其作用机制研究成为广泛关注的研究热点。肝脏是体内最大的代谢器官,也是清除内毒素和解毒的主要脏器。正常人肠腔内由于细菌的繁殖和死亡不断产生的内毒素可通过肠粘膜屏障微量间歇吸收入血,再经门静脉到达肝脏,很快被枯否细胞吞噬清除,从而维持内环境的稳定。当急性肝衰竭时,肠道屏障功能削弱,肠源性内毒素吸收增加,加上肝脏枯否细胞的清除功能下降引起内毒素灭活减少,最终大量内毒素进入体循环从而导致内毒素血症。据报道,内毒素血症的发生率在急性肝衰竭中约为80-100%;而肝脏也是体内遭受内毒素攻击的首要靶器官:lps可直接破坏肝细胞结构,造成肝窦淤血和肝细胞坏死,引起能量代谢障碍;同时间接激活以枯否细胞为主的多种炎症细胞,分泌以tnf-α为主的多种炎性因子,介导瀑布样级联放大炎症反应,进一步加重肝细胞的损伤,lps还可增强乙醇和四氯化碳等肝毒性物质的肝毒性,加重肝硬化、酒精性肝病等其他原因造成的肝损伤。内毒素血症与肝功能损伤两者互为因果,相互影响,继而形成恶性循环,极大地威胁着患者的生命与安全。如何阻断该循环中的某些链条,有效防止内毒素对肝脏的进一步损害是问题的关键。迄今为止,临床仍缺乏特殊、有效的手段治疗内毒素引起的肝损伤。脂多糖/d-氨基半乳糖(lipopolysaccharide/d-galactosamine,lps/d-gal)所致小鼠急性肝衰竭是国内外学者普遍认可和沿用的动物模型,该模型较为理想地模拟了与临床病毒性肝衰竭较为相似的肝脏生物化学及代谢方面的改变及并发内、外源性内毒素血症的情况。为全面地研究肝损伤和内毒素血症之间相互关系提供基础,并可为临床上寻找新的治疗急性肝衰竭方案提供可靠的途径。本课题建立了lps/d-gal所致小鼠急性肝衰竭模型,探讨了血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,angⅡ)在炎症反应中的变化和作用,研究血管紧张素系统在急性肝衰竭病程中的作用及机制,为临床上危重的急性肝衰竭寻找新的可能治疗靶点。方法:1.复制lps/d-gal诱导的balb/c小鼠急性肝衰竭的模型,在lps/d-gal处理前0.5小时腹腔注射空白溶剂或不同浓度的卡托普利(captopril)/络沙坦(losartan)/三氮脒(diminazene,dize),以观察与血管紧张素系统有关的不同药物在急肝衰竭中的作用。2.lps/d-gal处理后1.5小时麻醉处死各组小鼠,采集血清和肝脏样本,检测样本中炎症因子tnf-α、il-6的水平,蛋白质印迹法检测炎症相关信号通路nf-κbp65的活性及jnk、p38mapk的磷酸化水平。3.lps/d-gal处理后6小时麻醉处死各组小鼠,采集血清和肝脏样本,观测肝组织受损的病理改变;检测样本中炎症因子angⅡ、no与mpo的含量;反应肝功能状况的相关酶指标alt与ast;反应肝脏氧化应激水平的指标mda、sod;tunel测定肝组织凋亡情况及凋亡相关酶caspase-3,-8,-9的活性测定,蛋白质印迹法检测cleavedcaspase-3活性。结果:captopril/dize能显著减轻lps/d-gal诱导的小鼠急性肝衰竭,但losartan尚未见此作用:1.captopril/dize能显著降低损伤模型组的alt与ast的水平减轻肝脏的病理学改变,提高生存率。2.captopril/dize能显著降低血清与肝组织中炎症相关介质angⅡ、tnf-α、il-6、mpo的水平同时上升no水平,减轻lps/d-gal诱导的炎症反应。3.captopril/DIZE能提高肝组织SOD的活性,降低MDA水平从而减轻LPS/D-Gal诱导的氧化应激反应。4.captopril/DIZE可以抑制凋亡相关蛋白caspase-3,-8,-9的活性,下调cleaved caspase-3的表达从而减轻LPS/D-Gal诱导的肝组织凋亡。5.captopril/DIZE可以抑制炎症相关信号通路NF-κB p65活性及MAPK家族中JNK、p38 MAPK的磷酸化水平。结论:AngⅡ在LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝衰竭的发病过程中可能起到关键的促炎作用,降低其水平的药物可以很好地缓解肝组织的损伤程度;ACEI及ACE2激动剂可作为新的靶点用于治疗LPS诱导的急性肝衰竭的研究。而应用AT1R受体阻滞剂络沙坦并未见对肝脏有保护作用,或提示AngⅡ在LPS/D-Gal诱导的小鼠急性肝衰竭中发挥促炎效应的途径并不主要通过AT1R来介导,其具体机制需进一步研究。