合成色素是通过化学合成的方法合成的，相对于天然色素而言，目前在全世界应用最为普遍。常见的合成色素大多都是偶氮类，例如酸性橙Ⅱ(OrangeⅡ)、苏丹红Ⅰ-Ⅳ(SudanⅠ-Ⅳ)、日落黄(Sunset Yellow)、酸性红(Carmosine)等等。相比于天然色素，合成色素在价格、颜色、稳定性和成本上都有巨大的优势，但合成色素的安全问题，尤其是潜在的致癌和致畸性，受到越来越多的各国科学研究者重视。我国食用合成色素的用量逐年增加，一系列恶性食品安全事件频频发生，直接威胁到广大消费者的生命及身体健康。我国的食品产品中，非法添加或者违规添加合成色素的现象愈演愈烈，而现有的标准检测方法一液相色谱检测法在检测过程中耗时长，检验步骤复杂，因此，开发更加简便、即时、准确性的检测方法就非常急迫和意义重大。　　 各国研究学者已开发出许多检测方法，针对合成色素的检测。目前在合成色素检测的文献研究报道中，主要有色谱法、电化学法、分光光度法等。而这三种方法都有普遍的问题：仪器价格昂贵，操作繁琐，分析前处理非常复杂，样品的处理净化过程很繁琐。而免疫分析方法相对来说更加经济、样本前处理过程简单，大大提高了检测速度，该法利用抗原.抗体间的高特异性结合，专属性强，检测限可达ng至pg的级别，因而应用前景非常广泛。　　 本研究拟建立两种常见偶氮类合成色素-酸性橙Ⅱ及日落黄的快速酶联免疫吸附检测法(ELISA)。我们对酸性橙Ⅱ小分子半抗原成功的进行了结构改造，避免了互变异构带来的障碍，针对其磺酸基团设计实施了一系列化学反应，并且成功的与偶联剂和载体蛋白相结合，成功制备出酸性橙Ⅱ免疫原和包被抗原(两种合成方案，每种方案3只兔子)，免疫健康雄性新西兰大白兔，心脏采血后，所获得的抗体效价>1/160000，用酸性橙Ⅱ作竞争抑制率曲线，检测限为0.11ngmL-1，半数抑制浓度(IC50)为0.61 ng mL-1。该多克隆抗体特异性良好，与酸性红B交叉反应率<0.01％，与栀子黄交叉反应率<0.001％，与胭脂红交叉反应率<0.0001％，与日落黄交叉反应率<0.0001％。选取辣椒面、辣椒油、卤肉作为食品检测体系，添加回收率在84.0％-131.8％之间，变异系数在2.8％-20.0%之间，表明该方法在食品样品检测时重复性、精确度、准确度较好。　　 鉴于日落黄带有两个磺酸基团以及互变异构的复杂性，采取重氮化反应重新合成日落黄的结构改造物，引入末端羧基作为活性基团。与偶联剂和载体蛋白相结合，制备出日落黄免疫原和包被抗原(两种合成方案，每种方案2只兔子)，免疫健康雄性新西兰大白兔，心脏采血后，得到的抗体效价>1/160000，用日落黄作竞争抑制率曲线，检测限为0.10 ng/mL，IC50为0.52 ng/mL。该多克隆抗体特异性良好，与胭脂红交叉反应率<0.1％，与苋菜红交叉反应率<0.01％，与酸性红B交叉反应率<0.01％，与柠檬黄交叉反应率<0.001％，与喹啉黄交叉反应率<0.001％，与栀子黄交叉反应率<0.001％。　　 本实验利用化学修饰得到偶氮类合成色素酸性橙Ⅱ和日落黄的人工免疫原，所得抗体效价理想，特异性较强。依此建立了的ELISA检测方法，灵敏度高，满足检测标准的要求，与其它结构类似物交叉反应率小，检测时不易受干扰，食品样品的添加回收率和重复性结果较好。本研究所建立的ELISA法能够快速、准确、灵敏筛选食品产品中酸性橙Ⅱ和日落黄，对于控制抽检成本、提高检测效率、确保检测准确性、保证食品市场合规具有重要的意义。