合萌提取物促进大鼠皮肤创面愈合的实验研究

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皮肤是人体最大的器官,由于直接暴露于环境中,故而不可避免的受到损伤。时至今日,创伤仍然对人类身体健康和经济发展构成巨大威胁。据估计,全球每年大约开展2.34亿例各类型手术;仅在美国,每年大约有50万烧伤患者住院;在发达国家,1~2%的人患有/患过慢性难愈性创面。每年,由创伤所带来的直接经济损失高达67亿美元,并且在不断攀升。伴随着皮肤创伤而来的另一大问题则是瘢痕,据估计,抗瘢痕药物每年的销售额高达120亿美元。为了加速创伤愈合及改善瘢痕,人类付出了巨大的努力。但由于创伤愈合是一个极其复杂的过程,我们所取得的成绩非常有限。到目前为止,临床上还没有一款普适性的具有良好的促进创伤愈合及抗瘢痕的药物。鉴于上述现实,着力开发一款具有明显的促进皮肤创面愈合及抗瘢痕生成的药物已经成为了人们的迫切需要。目的:验证合萌(AIL)提取物促进创面愈合的功效;应用以生物活性为导向的靶向分离方法找到合萌提取物中具有促进创面愈合功效的成分所在的组相;研究合萌提取物促进创面愈合及抗瘢痕生成的机制。方法:采用有机溶剂萃取及柱层析的方法分离纯化合萌提取物;以大鼠全层皮肤切除创伤模型考察合萌提取物及各分离组相的促愈合活性;对大鼠皮肤创面样本行H&E染色及苦味酸-天狼星红染色,分别对创面组织进行病理学分析及计算创面组织中Col I/III比例;通过对创面组织行免疫组织化学染色,分析CD68、CCR7、CD163、TGF-β1及α-SMA的表达量,以评价创面组织中巨噬细胞由M1型向M2型转化的速率及EMT(上皮-间质转化)的程度。结果:合萌提取物具有明显的促进皮肤创面愈合的作用,利用以生物活性为导向的靶向分离方法找到了合萌提取物中具有促进创面愈合功效的成分,即Sub-Fr.2组相;H&E染色结果显示,相对于空白对照组,Sub-Fr.2组的大鼠皮肤创面显示更轻的炎性细胞聚集,更快的微血管再生,成纤维细胞增殖与胶原蛋白合成的速率增加,皮肤附属物的再生得到促进。苦味酸-天狼星红染色的结果表明,比之空白对照组,Sub-Fr.2组的大鼠皮肤创面组织中Col III的比例更高。对大鼠创面组织中CD68、CCR7、CD163、TGF-β1及α-SMA的免疫组织化学染色结果表明,Sub-Fr.2组大鼠皮肤创面相对于空白对照组有更少的巨噬细胞浸润,且巨噬细胞更快地由M1型向M2型转变;Sub-Fr.2组大鼠皮肤创面的TGF-β1及α-SMA表达量明显低于空白对照组。结论:合萌提取物及其活性成分所在组相(Sub-Fr.2)具有明显的促进大鼠皮肤创面愈合及抗瘢痕生成的功效。这是通过加速创面组织中巨噬细胞由M1型向M2型转化及抑制EMT过程来实现的。
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