膝骨关节炎与正常人血浆microRNA表达差异研究

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1研究目的:基于中医治未病的理论体系,通过对膝骨关节炎与正常人血浆microRNA异常表达的研究,筛选出膝骨关节炎与正常人血浆表达差异的microRNA,将其用于膝骨关节炎的早期诊断,或者膝骨关节炎的预后判断,给中医治未病理论提供新的观点方法。2研究方法:纳入中国中医科学院望京医院关节一科门诊13例原发膝骨关节炎的志愿者血浆和13例没有任何遗传家族病史及健康人的血浆,将获取的血浆样本送于华大基因(BGI)深圳华大基因科技服务有限公司处理后进行RNA提取工作,通过目前最先进的RT-PCR方法,采用新一代HiSeq高通量测序技术对样品中的microRNA做数字化精确性分析,分析检测筛选各标本中microRNA;筛选出的表达差异的microRNA,绘制出实验样品间的microRNA的分散图。为取得我们所需要的可信分子序列,本次实验需要对初始数据材料做去除接头、去污染序列及去低质量序列的相关处理。再对该可信任的分子序列进行RNA序列长度分布统计和样本间公共序列的统计。根据筛选条件fold change值>1且差异性明显P值<0.01,具有统计意义,对两组血浆进行比较筛选出潜在的骨关节炎致病基因。3研究结果:在各组的microRNA表达差异研究对比发现,在原发膝骨关节炎患者血浆中存在很多microRNA中高表达。而这些存在差异表达的microRNA,正是本次实验需要筛选出来,根据统计学,筛选条件fold change值>1且差异性明显P值<0.01,具有统计意义,经过实验的筛选测序,发现其中仅hsa-miR-378c、hsa-miR-1268a、hsa-miR-483-5p、 hsafmiR-375和hsa-miR-1275为符合条件的microRNA,在膝骨关节炎血浆中高表达。4结论:在所有检测样品标本已知microRNA中,在fold change值>1且P值<0.01的条件下,共计筛选出5中microRNA,这5种microRNA分别是hsa-miR-378c、hsa-miR-1268a、 hsa-mi R-483-5p、hsa-miR-375和hsa-miR-1275在原发骨关节炎患者血浆中表达量明显升高,本次实验研究提示我们这5种microRNA为膝骨关节炎发病的潜在致病基因。此实验结果可以为膝骨关节炎的早期诊断及预后提供新的技术,为中医治未病提供全新的依据。
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