两株拮抗山药炭疽病菌活性放线菌的代谢产物研究

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山药炭疽病是危害山药生产的主要病害之一,近年来,在全国各地大规模爆发,给山药产业造成严重的经济损失。本实验室前期筛选到两株对山药炭疽病菌表现出显著拮抗作用的放线菌HNM30702和HNM0452,本文采用高效液相色谱、凝胶柱Sephades LH-20层析、反相硅胶柱层析和薄层层析等一系列分离技术对这两株放线菌的活性代谢产物进行分离纯化,通过质谱、红外光谱、核磁共振分析和旋光测定等波谱技术对两者产生的抗菌活性物质进行结构鉴定,并进行了生物活性的评价,结果如下:(1)从放线菌HNM30702次级代谢产物中分离到3个活性单体化合物。其中化合物 1 为带有 N-N 键的哌嗪酸(Piperazicacidgroups,Pip)基团(SoliseptideA)的环状六肽,化合物2和3分别为大环内酯类抗生素阿扎霉素F4a(Azalomycin F4a)和阿扎霉素Fsa(AzalomycinF5a)。研究发现化合物1对人肠病毒71(EV71)具有抑制作用,IC50为23.0 μM,对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌也表现出抑制作用,MIC均为8 μg/ml;化合物2和3对山药炭疽病菌、芒果炭疽病菌、橡胶炭疽病菌、香蕉枯萎病菌和水稻稻瘟病菌五种植物病原真菌表现出显著的抗菌作用,MIC分别为 1.25、1.25、1.25、2.5、2.5 μg/ml 和 2.5、5、2.5、5、5 μg/ml,在农用抗生素的开发上具有一定的应用价值。(2)从放线菌HNM0452次级代谢产物中分离到6个活性单体化合物。其中化合物4和5为聚酮类抗生素替达霉素A(Tirandamycins A)和替达霉素B(TirandamycinsB),化合物6为光色素,化合物7为核苷类化合物腺嘌呤核苷(Adenosine),化合物8为生物碱类化合物咖啡碱(Caffeine),化合物9为4-羟苯甲酯。研究发现化合物4~9均表现出明显的抗无乳链球菌活性,MIC分别为2.5、5、2.5、20、20、80μg/ml;化合物7、8和9对金黄色葡萄球菌表现出一定的抗菌活性,MIC 分别为 40、20、80 μg/ml。(3)采用16SrRNA基因序列分析结合多位点序列分析(MLSA)技术,将菌株HNM30702鉴定为紫黑链霉菌16S rRNA基因进化分枝(Streptomyces violaceusniger 16S rRNAgene clade)中的Streptomyces solisilvae,将菌株 HNM0452鉴定为链霉菌属(Streptomyces)的放线菌。
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