绿僵菌素(Destruxins)是由金龟子绿僵菌等昆虫病原真菌分泌的一类昆虫病原真菌毒素,目前已知其有40余种结构类似物,均是由一个α-羟基酸和5个氨基酸残基组成的环缩肽类化合物,其中绿僵菌素A、B和E的生物活性较高。在绿僵菌侵染寄主的过程中,绿僵菌素可以加速被侵染昆虫的死亡,所以绿僵菌素与绿僵菌的致病力密切相关。绿僵菌素具有多种生物活性,如杀虫、除草、抗病毒、降低昆虫细胞免疫活性及细胞毒性。但通常绿僵菌对绿僵菌素的产量较低,所以优化绿僵菌产毒素发酵培养基,提高毒素产量显得至关重要。此外,乳油和可湿性粉剂等传统剂型在我国农药市场仍占有很大的市场份额。水乳剂作为可替代品种之一,具有应用安全、成本低和环境污染小等特点,推广应用水乳剂等农药新剂型,正符合农业部提出的农药减量增效。本文研究了绿僵菌产绿僵菌素A液体发酵培养基优化、绿僵菌粗毒素与农药复配对斜纹夜蛾的联合毒力作用及10%绿僵菌粗毒素·溴氰菊酯复配水乳剂的研制。研究结果如下:1、应用响应面法确定了影响绿僵菌发酵的3个关键因素:碳源(蔗糖)、氮源(蛋白胨)和发酵时间,进而用中心组合试验设计对3个关键因素进行设计,得到一拟合程度高、试验误差小的模型。由该模型预测得到的绿僵菌素A浓度为6.90μg/mL,最佳培养条件为:蔗糖(碳源)含量2.27%、蛋白胨(氮源)含量1.34%、β-丙氨酸0.20%、培养时间9.70d、pH为8左右、温度28℃左右、转速在220r/min以及装液量为1L三角瓶装300mL培养基。2、以斜纹夜蛾为试虫,筛选得到具有增效作用的组合:溴氰菊酯和绿僵菌粗毒素(c.f=28.69)、毒死蜱和绿僵菌粗毒素(c.f=22.60);氯虫苯甲酰胺和绿僵菌粗毒素(c.f=20.42)。以绿僵菌粗毒素和溴氰菊酯进行合理配比的研究表明,两者有效成分比在6.25:1时毒性比率为1.71,有效成分比在14.05:1时毒性比率为1.35,其余不同配比的毒性比率均小于1。绿僵菌粗毒素和溴氰菊酯以有效成分6.25:1混配时的共毒系数达238.47远大于120,表现出了显著增效作用。3、在试验条件下拟三元相图表明,阴离子型表面活性剂农乳500#和非离子型表面活性剂OP-10、NP-10、吐温80和吐温60均可单独形成乳液。农乳500#与吐温80和吐温60以1:3的比例混合时形成的乳液区面积比其余比例的面积最大。稳定性试验表明,在用量6%的情况下吐温80:500#(3:1)较为稳定。4、试验筛选得到稳定性较好的三种复配水乳剂组合:(1)10%绿僵菌粗毒素·溴氰菊酯、20%甲苯、6%的乳化剂(吐温80:农乳500#=3:1)、5%异丙醇、5%甘油,去离子水补充至100%;(2)10%绿僵菌粗毒素·溴氰菊酯、20%甲苯、6%的乳化剂(吐温80:农乳500#=3:1)、5%乙醇、5%乙二醇,去离子水补充至100%;(3)10%绿僵菌粗毒素·溴氰菊酯、20%甲苯、6%的乳化剂(吐温80:农乳500#=3:1)、5%乙醇、5%乙二醇,蒸馏水补充至100%。经过乳液稳定性测定,以上三种组合的各项指标均达到合格要求。