目的:探究伊维菌素抑制膀胱癌细胞增殖的潜在分子机制,初步探索伊维菌素对膀胱癌细胞的影响以及与细胞自噬的关系。深入了解和认识伊膀胱癌细胞自噬小体形成过程中自噬蛋白功能发生变化的特点,为膀胱癌的预防及治疗寻找新的靶点。方法:采用两种膀胱癌细胞T24、5637和正常SV-HUC-1细胞,利用CCK-8实验对伊维菌素药物浓度进行筛选,分析出IC50后将实验组组别分成0/5/10/20μM。观察克隆形成实验,各个伊维菌素浓度之间的区别。Tunnel实验检测凋亡细胞阳性率的变化膀胱的影响作用。利用Western Blot研究伊维菌素处理后T24、5637细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2和Cleaved-casepase-3的趋势,以及自噬相关蛋白LC3、Atg5、Beclin1、P62的变化及Hedgehog通路蛋白SHH、Gli1、Su Fu的变化。利用免疫荧光实验检测LC3、P62蛋白表达情况。利用透射电镜观测10μM伊维菌素处理组中膀胱癌细胞自噬小体的形成。结果:与SV-HUC-1细胞相比,CCK-8实验发现伊维菌素处理后的膀胱癌细胞系T24、5637呈现出更高浓度的IC50。在克隆形成实验中,实验组中的膀胱癌细胞团的增殖能力与零加药的对照组相比呈抑制状态,并在5μM、10μM、20μM的实验组中呈下降趋势;在Western Blot检测中,0μM、5μM、10μM和20μM实验组的Bcl-2蛋白表达呈下降趋势,相反Cleaved-Casepase-3蛋白表达呈上升趋势,此外,自噬相关蛋白LC3II、Beclin1、Atg5呈剂量依赖性升高,而P62蛋白表达则呈相反趋势。tunel实验验证了凋亡阳性率的变化,与对照组相比,10μM伊维菌素实验组凋亡蛋白的阳性率较高。在T24和5637膀胱癌细胞的流式细胞术检测中,伊维菌素浓度为0μM、5μM、10μM、20μM的组别凋亡百分比呈上升趋势。免疫荧光实验中发现,10μM伊维菌素处理后的实验组中LC3蛋白相较DMSO对照组在细胞质中表达增加,P62在10μM伊维菌素实验组中的细胞质表达下降。同时,利用透射电镜观察到10μM伊维菌素实验组中的自噬小体呈上升趋势。Western Blot检测了伊维菌素处理后的Hedgehog通路蛋白,SHH、Gli1蛋白随着药物浓度的增加而下降,SuFu随着药物浓度的增加而增加。结论:伊维菌素能够通过诱导膀胱癌细胞Hedgehog通路发生变化,在Hh通路的影响下引起膀胱癌细胞凋亡及自噬。伊维菌素相较正常膀胱上皮细胞能够对膀胱癌细胞产生增殖的抑制作用,这会伊维菌素的抗肿瘤治疗方案提供一种可能。