论文部分内容阅读
为了解猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)在广西区的流行情况,本研究根据GenBank中所发表的PRRSV美洲型经典株、高致病性变异株及欧洲株的Nsp2基因序列,设计并合成了两对特异性引物,建立了两种RT-PCR检测方法。第一种方法利用引物Eur7/Eur8从PRRSV的美洲型和欧洲型毒株中分别扩增出666bp和572bp的片段；第二种方法利用引物Pa/Pb从PRRSV美洲型的经典株和高致病性变异株中扩增出523bp和433bp片段。实验验证,这两种方法对猪瘟病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪流感病毒、口蹄疫A型、O型、亚Ⅰ型病毒扩增结果均为阴性；引物Eur7/Eur8能检测出的最小RNA浓度为7.68×10-3μg/ml,引物Pa/Pb为7.76×10-5μg/ml。实验证明建立的两种RT-PCR方法具有良好的特异性、敏感度和重复性,第一种方法能快速、准确的检测并鉴别出PRRSV美洲型和欧洲型毒株,第二种方法可以区分美洲型经典株和高致病性变异株,两种方法联合使用可以作为PRRSV临床诊断、病料检测和流行病学调查的有效方法。应用所建立的两种RT-PCR方法对2012年2月至2014年1月两年间广西区内11个地市,76个猪场的2355份病料进行了病原学检测。检测结果显示,共有324份PRRSV阳性,总阳性率为13.76%,其中美洲型经典株77份,阳性率为为3.270%,变异株247份,阳性率为10.49%,未检测到欧洲株。11个地市中除防城港外均有检测到PRRSV,且大部分地市的美洲型变异株阳性率多为经典株的数倍；秋季的PRRSV阳性率比其他三个季节要高；2013年总体上来说阳性率比2012年要有所升高,表明广西区内流行的PRRS有扩散和加重的趋势,且主要流行的PRRSV为美洲型的变异株,其次为经典株,欧洲株则暂未被发现。