尿素调节蝉拟青霉合成胞外皂苷机制及其抗氧化活性研究

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蝉花是一种传统的药食两用真菌,而蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)是蝉花的无性阶段,含有多种氨基酸、无机盐、多糖、皂苷、虫草素等多种营养成分和生药学成分。针对天然蝉花资源匮乏,人工栽培蝉花困难等蝉花资源利用的瓶颈以及对蝉花活性成分研究甚少问题,本论文利用液态深层发酵技术开发利用蝉拟青霉菌丝体资源以期满足市场的蝉花需求同时对蝉花皂苷活性成分进行研究。主要研究内容包括:尿素协同培养基成分以及培养条件共同促进蝉拟青霉胞外皂苷的合成;利用转录组学研究尿素调节蝉拟青霉胞外皂苷合成的机制以及尿素对蝉拟青霉胞外皂苷抗氧化活性的影响,得到以下研究成果:(1)通过碳氮源、无机盐、营养因子的单因素分析及它们协同尿素增强皂苷合成的响应面设计试验,得到高产蝉拟青霉胞外皂苷的最佳培养基组分,即麸皮3.7%、木糖4.43%、果糖4.73%、甘油1.14%、尿素0.13%、鱼粉蛋白胨0.85%、KH2PO4 0.16%、ZnSO4 0.16%、VB2 0.0136%、VC 0.0145%。(2)尿素协同培养条件得到蝉拟青霉合成胞外皂苷最大产率条件为:培养温度26℃、培养转速160 r/min、接种量5%、接液量105 mL、培养时间108 h,应用最佳培养基组分,在最佳培养条件下对蝉拟青霉液态发酵培养,皂苷产量高达14.73 mg/mL。(3)利用转录组学分析尿素调节蝉拟青霉合成胞外皂苷的机制。结果显示利用短reads组装软件Trinity组装蝉拟青霉基因17321个,尿素导致1800个差异基因,其中上调基因718个,下调基因1082个;GO功能富集后,尿素导致1416个差异基因被注释到GO功能分析中;在KEGG途径特定基因中,尿素导致512个差异表达基因,主要集中在代谢途径中;并在蝉拟青霉差异表达基因中首次发现了调节皂苷合成的甾醇调节元件结合蛋白基因。(4)通过三种体系(DPPH·、·OH、铁还原抗氧化力)研究了尿素导致蝉拟青霉胞外皂苷的体外抗氧化能力差异。结果表明蝉拟青霉皂苷具有良好的抗氧化能力,其抗氧化能力的大小与皂苷浓度呈剂量依赖且尿素组对DPPH·清除能力、抑制·OH生成能力和铁还原抗氧化力显著增强。动力学分析显示添加尿素合成的皂苷通过增加对底物的亲和力或通过增加清除DPPH·和总抗氧化性的最大反应速率较大的组分来提高抗氧化性,并且发现皂苷对·OH生成的抑制类型属于竞争性抑制。
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