猪瘟是危害养猪业的重要疾病。特异性抗体具有较好的治疗效果，但从动物分离高免血清或制备单克隆抗体价格高、产量低，不适合大量生产；而卵黄抗体（IgY）来源广、成本低，适合大规模生产。近年来关于IgY的研究越来越多，其在疾病防治方面收到好的效果。本试验主要探讨抗猪瘟卵黄抗体的制备，卵黄抗体ELISA检测方法的建立，同时研究卵黄抗体喷雾干燥工艺及其保护剂。方法：1.抗猪瘟卵黄抗体ELISA检测方法的建立（1）采用猪瘟疫苗病毒包被酶标板，经氯仿提取的阴、阳性卵黄抗体作为一抗，用方阵滴定法进行抗原最佳包被浓度、酶标二抗工作浓度的确定；比较P/N值，确定各步孵育时间。（2）选取未免疫猪瘟疫苗的鸡蛋30枚，氯仿法提取抗体，测其OD值，依据统计学方法计算阴阳临界值；用已知效价的卵黄抗体经IHA和已建立的ELISA方法进行对比试验，比较两种方法的敏感性；选取禽流感、新城疫、猪腹泻二联苗阳性卵黄抗体，同时以猪瘟阳性与阴性血清抗体作为对照，检测ELISA方法的特异性；检测建立的ELISA方法的重复性。2.猪瘟卵黄抗体的制备及品质检测（1）选取200日龄健康海兰灰蛋鸡50只，用灭活猪瘟疫苗胸部肌肉分点注射，取免疫后不同天数的鸡蛋提取卵黄抗体。用已建立的ELISA方法进行检测，当效价下降到一半时，进行下一次免疫。收集效价达到1:4096的鸡蛋，用水稀释法提取卵黄抗体。（2）将提取的卵黄抗体接种普通营养琼脂和厌氧肉汤培养基中，37℃培养24h，观察细菌生长情况。动物安全性试验，将提取的卵黄抗体给小鼠和雏鸡注射，观察动物精神状态，72h后剖检，观察心、肝、脾、肺、肾等器官有无病理变化。3.喷雾干燥保护剂的筛选及工艺研究用葡萄糖、蔗糖、脱脂乳、乳糖、海藻糖分别做抗体保护剂，将提取的卵黄抗体进行喷雾干燥。观察上述物质的浓度变化对抗体活性的保留水平的保护作用，对比五种糖在高温下对抗体的保护水平。筛选最佳保护剂及保护浓度。设计入口温度、进料速度、糖浓度的3因素3水平正交试验，分析3因素对抗体活性及出粉率两个指标的影响水平，选取最佳喷雾工艺。试验结果如下：1.（1）抗原最佳包被浓度为1:1000，酶标二抗工作浓度为1:6000，一抗稀释至1:1024时，阳性值在1.000左右，且相邻孔的OD值变化较大。其所对应的阴性值小于0.2，且P/N值最大。实验条件的优化结果：2％的明胶37℃封闭30min，一抗和二抗最佳孵育条件分别为37℃1h和45min，最佳显色时间为室温20min， OD450nm值接近1，且P/N值较大。（2）经计算，30份猪瘟阴性卵黄抗体平均值(X)为:0.103，标准差（SD）为0.014。根据统计学分析，OD450nm值≥0.145时，判定为阳性；OD450nm值＜0.131时，判定为阴性；OD450nm值介于两者之间为可疑。猪瘟阳性卵黄抗体经IHA检测效价为27。将此卵黄抗体用建立的间接ELISA方法检测，抗体倍比稀释至214后，仍能检测出阳性，表明建立的ELISA方法具有很高的灵敏性。HI效价分别为26、29的H9亚型禽流感和新城疫的阳性卵黄抗体及猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联苗的阳性卵黄抗体，同阴性猪瘟血清抗体检测结果一致，其值均小于0.131，而阳性猪瘟血清抗体值为1.112，表明该方法特异性较强。5份卵黄抗体分别经同一批次制备的酶标板和不同批次的酶标板检测，结果经统计学分析变异系数均小于10％，表明具有良好的重复性。2.（1）三免后抗体最高水平达1:4096。四免后抗体最高水平达1:8192，维持时间约一个月。（2）水稀释法提取的卵黄液黄色均匀，无特殊气味，经普通营养琼脂和厌氧肉汤培养基37℃培养24小时均无细菌生长；注射后的雏鸡及小鼠生长良好，未见异常，剖检未见内脏器官有病理变化。3.加入保护剂时，喷雾干燥后的抗体活性保留率较高（数值范围），极显著高于未加保护剂组的38.49%（P<0.01）。对比五种保护剂同一添加浓度下对抗体活性保留效果：葡萄糖>海藻糖>蔗糖>乳糖>脱脂乳。选取0.25%葡萄糖添加浓度，进行喷雾干燥工艺单因素试验分析：进料速度对抗体活性无明显影响，但对出粉率影响较大。进料600-1300ml/h之间时，抗体活性保留均能维持在90%以上，出粉率在800ml/h时显著下降为31.36%（P<0.05）。入口温度：抗体活性随着入口温度的增加而降低。在入口温度70℃-120℃之间时活性保留均在92%以上，在入口温度130℃-160℃时显著降低（P<0.05）。出粉率随着温度的升高而显著性升高（P<0.05）。正交试验结果：喷雾条件为150℃、500ml/h、0.25%时出粉最高，条件为70℃、700ml/h、0.06%时活性保留最高。出粉率影响因素：入口温度（78.75）>糖浓度（9.5）>进料速度（5.5），且78.75>19入口温度的影响差异显著。活性分析中，3因素对活性保留影响F比均小于19，所以差异均不显著。结论：1.成功建立了检测猪瘟卵黄抗体的ELISA方法试验表明，采用灭活猪瘟疫苗病毒包被酶标板，性质稳定。建立的方法敏感性高、特异性好、可重复性强。2.成功制备了抗猪瘟卵黄抗体通过给蛋鸡多次注射猪瘟灭活苗，能够获得高效价卵黄抗体；提取的卵黄抗体经验证安全、无菌，在经10倍稀释后依然能够中和一头份剂量的猪瘟疫苗。3.建立优化了卵黄抗体的喷雾干燥工艺正交试验分析表明，3个水平的进料速度和糖浓度对抗体活性和出粉率影响差异均不显著。不同入口温度对出粉率影响差异显著（P<0.05），但对抗体活性影响差异不显著。选取入口温度为150°、进料速度700ml/h、糖浓度0.06%时抗体活性保留约为100%，出粉率82.5%。