达格列净对糖尿病肾脏病的保护作用及机制研究

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目的:通过观察糖尿病大鼠尿白蛋白排泄、肾脏组织病理形态,肾脏组织和尿液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA和蛋白表达,丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白磷酸化表达,以及达格列净治疗后上述指标的的变化,探讨达格列净对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:将SD大鼠随机均分为四组:正常组(NC组)、达格列净干预正常组(ND组)、糖尿病组(DM组)、达格列净干预糖尿病组(DD组)。ND组及DD组大鼠分别给予达格列净(1mg/kg/d)灌胃8周。ELISA法测各组大鼠尿微量白蛋白,WST-1法测肾脏组织和尿液SOD活性、TBA法测肾脏组织和尿液MDA含量,RT-PCR测肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA表达,western blot测肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)、磷酸化p38MAPK蛋白表达,PAS及HE染色观察肾脏组织病理形态。结果:相对于正常大鼠,糖尿病大鼠尿微量白蛋白排泄增多,肾脏组织和尿液SOD活性减弱,MDA含量增加,肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA和蛋白表达增强,磷酸化p38MAPK蛋白表达增强,肾脏组织病理改变明显。给予达格列净治疗后,糖尿病大鼠尿微量白蛋白排泄减少,肾脏组织和尿液SOD活性增强,MDA含量减少,同时肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA和蛋白表达减弱,磷酸化p38MAPK蛋白表达减弱,肾脏组织病理形态改善。结论:达格列净可能通过降低血糖,抑制p38MAPK信号通路,减轻氧化应激,进而保护肾脏。目的:观察体外高浓度葡萄糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MCs)活性氧(Reactive oxygen species,ROS)产生、p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA及蛋白表达、p38MAPK蛋白磷酸化表达和细胞培养上清液中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及达格列净干预后上述指标的的变化,探讨达格列净对MCs氧化应激的影响。方法将肾小球系膜细胞分为四组:低糖培养组、达格列净干预低糖培养组、高糖培养组、达格列净干预高糖培养组,细胞培养48小时后,收集细胞及上清液。WST-1法检测细胞上清液SOD活性,TBA法检测细胞上清液MDA含量。流式细胞术检测肾小球系膜细胞内ROS水平,RT-PCR检测肾小球系膜细胞p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA表达,Western blot检测肾小球系膜细胞p22phox、p67phox、Nox2(pg91)、磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果:相对于低糖培养大鼠肾小球系膜细胞,高糖培养大鼠肾小球系膜细胞SOD活性减弱,MDA含量增加,系膜细胞内ROS水平升高,系膜细胞p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA及蛋白表达增强,磷酸化P38MAPK蛋白表达增强;达格列净干预后,高糖培养大鼠肾小球系膜细胞上清液SOD活性增强,MDA含量减少,同时系膜细胞内ROS水平下降,系膜细胞p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA和蛋白表达减弱,磷酸化P38MAPK蛋白表达减弱。结论:达格列净可能通过减轻氧化应激,抑制p38MAPK信号通路,进而保护肾脏。
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