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目的:体外诱导扩增小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),利用含胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸的寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)和/或结肠癌CT26细胞冻融物刺激并致敏,制成树突状细胞疫苗,再在体外激活杀伤性T细胞(CTL),观察其对结肠癌CT26细胞的免疫杀伤效应。探索刺激DC成熟并增强DC疫苗的免疫效应的新方法,为临床应用提供参考。 方法:(1)无菌采用小鼠骨髓来源造血干细胞在rmGM-CSF和rmIL-4的联合诱导下产生DC,用CpG ODN及结肠癌CT26细胞冻融抗原联合或单独作用于DC,观察树突状细胞的形态学变化,流式细胞仪测定其表面分子CD83、CD86的表达情况;MTT法检测不同处理组DC刺激单个核细胞增殖能力;(2)ELISA方法测定DC细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ的分泌水平;不同处理组DC分别与同种异体脾细胞(单个核细胞)共同培养,诱导CTL,MTT检测各组CTL作用于CT26细胞的杀伤活性,并利用Annexin-Ⅴ方法测定细胞凋亡。 结果:(1)光镜观察显示刺激组骨髓来源的树突状细胞比未刺激组树突状细胞突起多,而且突起出现的早,尤以应用CpG ODN联合冻融抗原刺激组形态上最为典型。同时CpG ODN联合肿瘤冻融抗原刺激的DC表面共刺激分子CD83,CD86表达水平较其他组也有明显升高(p＜0.05)。MTT法检测不同处理组刺激单个核细胞增殖能力有明显差异(p＜0.05)。(2)ELISA方法显示CpG ODN联合冻融抗原刺激DC分泌IL-12及IFN-γ水平较其它刺激组增高(p＜0.05)。MTT法、Annexin-V法显示CpG ODN联合肿瘤冻融抗原刺激组DC激活的CTL可以致肿瘤细胞凋亡(p＜0.05)。 结论:(1)CpG ODN可以刺激DC形态和功能的成熟,能使DC表面共刺激分子CD83、CD86表达明显升高;(2)CpG ODN与肿瘤冻融抗原联合刺激的DC疫苗可以更有效地激活CTL,提高其抗肿瘤效应;(3)CpG ODN与肿瘤冻融抗原联合冲击的DC疫苗能刺激DC分泌更高水平的IL-12、IFN-γ等细胞因子,更有效地促进同种异体T细胞增殖,诱导结肠癌细胞凋亡。