聚合草多肽的酶法制备及其免疫活性研究

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为了提高聚合草利用价值,开发聚合草免疫活性肽,本研究测定了聚合草的营养成分和叶蛋白的氨基酸组成。结果表明,聚合草干品含粗蛋白24.3%,总膳食纤维29.52%,脂肪1.2%,碳水化合物19.3%,灰分19.7%,水分6.02%;叶蛋白共含18种氨基酸,氨基酸评分为40.37%,必需氨基酸评分为1.2487,说明聚合草是优质的蛋白源。利用Box-Behnken设计原理,以多肽含量为响应值,用响应面法构建数学模型,确定制备聚合草多肽的最优工艺条件。结果表明:将聚合草以8%的料水比打浆,添加3%纤维素酶,调节pH至6.0,45℃酶解2h后,再添加4.57%的碱性蛋白酶,调节pH至8.91,43.4℃酶解56min,酶解液中的多肽含量达0.664mg.mL-1。建立ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的体系(MTT法)和LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的体系(中性红法),探究酶解液和所制备的聚合草肽的免疫活性。结果发现,66、0.66和0.066μg.mL-1的聚合草多肽对小鼠脾淋巴细胞的增殖具有显著促进作用(P<0.05),66、6.6和0.66μg·mL-1的聚合草多肽对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有显著增强作用(P<0.05),因此聚合草肽的最适浓度为66μg·mL-1。用超滤离心法分离聚合草肽,得到组分P1(>10kDa)、P2(3~10kDa)和P3(<3kDa)并探究其免疫活性。结果表明,P3(0.597mg.mL-1)对小鼠脾淋巴细胞的增殖具有显著促进作用(P<0.05),并对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能具有显著增强作用(P<0.05)。
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