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一、胰岛β细胞凋亡在NOD鼠糖尿病发生发展过程中的作用研究 目的：观察NOD小鼠糖尿病的自然发病情况和胰岛β细胞凋亡的自然变化，探讨胰岛β细胞凋亡在NOD鼠糖尿病发生发展中的作用及其机制。 方法：采用TUNEL原位末端标记并SABC免疫组化法染凋亡β细胞；SABC免疫组化染色观察Fas，FasL表达；常规H-E染色，光镜下行胰岛炎评分。对新生期（1-21天龄）、4、6、12、30周龄NOD雌雄鼠进行β细胞凋亡率、胰岛内Fas，FasL表达和胰岛炎的观察。采用胶原酶静止消化和Ficoll不连续密度梯度离心分离纯化胰岛，半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）对12周龄小鼠进行胰岛内I-Aβg7、IL-1β、IFN-r、IL-4、Fas、TGF-β mRNA的检测，双抗体夹心ELISA法测血清IL-4、IFN-r。观察NOD鼠种群30周龄的自然发病率。 结果： 1．30周龄时NOD雌鼠糖尿病的发病率为84.6％（11/13），雄鼠为10.0％（1/10），雄鼠发病率低于雌鼠（P＜0.001）； 2．新生期NOD鼠和BalB/C鼠均存在胰岛β细胞凋亡峰，此时无胰岛炎。NOD雌、雄鼠β细胞凋亡率相似，均比同龄BalB/C鼠高；新生期NOD鼠胰岛可检测到Fas的表达，而BalB/C鼠FasL的表达较高； 中南大学 博士学位论文 3．6、12周龄雌鼠的 p细胞凋亡率均比同龄的雄鼠高，12周龄NOD雌鼠胰岛内 Fas表达较雄鼠增高，而FasL的表达h者无显著性区别； 4．4周龄NOD雌、雄鼠开始出现胰岛周围炎，6周龄时出现胰岛内炎，12周龄 时胰岛炎进一步加重，雌、雄鼠之间胰岛炎积分无区别，雌鼠胰岛炎积分与 p细胞凋亡率呈正相关，而雄鼠则无此相关关系； 5．12周龄NOD雄鼠胰岛内h－4 mRNA表达水平和血清h－4水平较NOD雌鼠增 高，而胰岛la（I－A i‘’）、IL－ID、f：N－r、Fas InRNA表达水平禾血清fN－r 水平则较NOD雌鼠降低，TGF－p mRNA的表达在雌雄鼠之间没有差别。结论：①NOD鼠胰岛p细胞凋亡的出现早于胰岛炎的发生，新生期胰岛p细胞的凋 亡峰可能启动了针对p细胞的自身兔疫反应；新生期NOD鼠p细胞凋亡高可 能与NOD鼠胰岛内Fas表达较高有关，而BalB几鼠FasL表达较高可能参与 其保护胰岛兔受免疫反应的损害。②性别和年龄因素影响NOD鼠糖尿病的进 程，NOD雄鼠发病率较雌鼠低，与其胰岛炎中T细胞以ThZ细胞及其细胞因 子IL－4为主，而促炎症细胞因子IL－16、IFN｛表达降低，从而使6细胞Fas 表达减少而抑制日细胞凋亡相关。③凋亡是NOD鼠胰岛p细胞死亡的主要方 式，在糖尿病的发生发展中起重要作用。