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血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,VIP)是催乳素(Prolactin,PRL)的主要释放因子,在鸟类的就巢过程中发挥着重要的作用,其垂体门脉血中的浓度在家鸡繁殖周期的不同阶段发生着规律性的变化。本研究以鸡VIP(cVIP)基因作为影响家鸡产蛋性能和就巢性能的主要候选基因,利用DNA池技术及DHPLC技术结合测序对鸡VIP基因的6963bp的序列进行筛查,共发现有25处变异(其中6处在之后的克隆测序中未检测到);通过对cVIP基因的克隆测序(测序长度为9304bp,覆盖了cVIP基因已知序列的89.5%),共检测到87个简约化信息位点,其中5’侧翼区32个,内含子中53个,编码区1个,3’侧翼区1个。其中在检测的结果中包含有6处不同碱基数的插入缺失(deletion/insertion)变异,并在5’调控区发现有两个微卫星位点(CATA的多次重复和GGCAT的多次重复)。结果也表明了克隆测序是检测突变较为有效的方法。
对家鸡和红色原鸡5’侧翼区及内含子区域的SNP多样性进行选择性检验发现,家鸡内含子区域和外显子区域的Dr、Der、FFt均达到显著或极显著水平,而原鸡仅为轻微的负值。
选取cVIP基因中5’-侧翼区的C-3143T位点、1-2648~-2650D位点、A.1784G位点,内含子2上的T+338C位点和G+780T位点以及外显子6上的G+4691A共6个位点,利用PCR-RFLP方法分析了这些位点在来航鸡、杏花鸡、丝羽乌骨鸡、隐性白洛克鸡、固始鸡、白耳黄鸡、藏鸡、茶花鸡和红色原鸡等9个品种的多样性,发现C-3143T位点、1-2648~.2650D位点、A.1784G位点和G+780T位点均与繁殖性能相关。通过在线分析(http://mofif.genome.adjp),cVIP基因5’侧翼区C-3143T位点、1-2648~.2650D位点、A-1784G位点是该基因转录调控因子所在的位置。基于这种分析,选取了C-3143T位点、1-2648~.2650D位点、A.1784G位点和G+780T位点作为标记位点,对杏花鸡与丝羽乌骨鸡的正反交群体、杏花鸡与隐性白洛克鸡的正反交群体、来航鸡与丝羽乌骨鸡的杂交F2代、隐性白洛克鸡和江西万载康乐黄鸡进行了基因型的检测及标记与性状的关联分析。研究发现,4个SNPs位点的多态性均与繁殖性状相关:1.C-3143T位点与畸形蛋数显著相关,TT型个体畸形蛋数的概率显著高于其它两种基因型个体;此外CC型个体在卧息次数显著高于TT型个体;CC型个体在就巢的持续时间显著长于TC型的个体。2.G+780T位点与首次就巢持续时间显著相关,GT型个体的首次就巢时间极显著长于TT型个体。GT型个体的就巢持续时间显著长于TT型个体。3.1-2648~-2650D位点与畸形蛋数显著相关,缺失型纯合子个体极显著高于插入型纯合子个体。4.A.1784G位点与畸形蛋数均存在显著相关,AG型个体极显著高于AA型个体。通过单倍型块分析还发现,1-2648~一2650D位点与A-1784G位点所构成的单倍型块与畸形蛋数存在极显著相关。