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晚期癌症患者往往伴随着剧烈的疼痛,严重影响患者的生活质量,骨癌痛(bone cancer pain,BCP)是其中常见的一种。目前常规临床治疗下,仍有45%患者的疼痛未得到有效控制,这与目前骨癌痛机制仍不完全清楚有关,故探究骨癌痛机制十分重要。G9a是一种组蛋白甲基转移酶,可调控多种基因的表达,参与多种病理生理的调节过程。研究表明,脊髓中多种组蛋白甲基转移酶在大鼠骨癌痛中起重要作用。但脊髓G9a在大鼠骨癌痛中的作用目前尚鲜有报道。故本研究拟从以下两部分探究脊髓G9a在大鼠骨癌痛中的作用。第一部分G9a在BCP大鼠脊髓中的表达目的:建立大鼠骨癌痛模型,观察BCP大鼠脊髓G9a表达的变化。方法:雌性SD大鼠40只,随机分为正常(normal)组(n=8)、假手术(sham)组(n=8)、BCP组(n=24)。Normal组不做任何处理;sham组大鼠左侧胫骨骨髓腔注入10μl热杀死的Walker 256肿瘤细胞(1×105个),余处理同BCP组;BCP组大鼠左侧胫骨骨髓腔注入10μl Walker 256肿瘤细胞(1×105个)。观察大鼠建模前(0 d)和建模后1、3、6、9、12、15、18 d行走疼痛评分(ambulatory score,AS)和von Frey诱发机械痛阈(paw withdrawal threshold,PWT)的改变(n=8);于6、12、18 d对各组大鼠左侧胫骨行X线摄片,观察大鼠左侧胫骨骨质破坏情况(n=4)。取normal组、sham组、BCP6d、BCP12d、BCP18d大鼠脊髓腰膨大部,采用real-time quantitative PCR(RT-q PCR)、蛋白免疫印迹法(western blot,WB)测定其脊髓中G9a m RNA及蛋白的表达改变(n=4)。结果:在18 d的观察期中,normal组和sham组相比,AS评分和PWT差异没有统计学意义(P>0.05)。与normal组相比,在建模后6-18 d,BCP组大鼠的AS评分进行性升高,PWT进行性降低,且差异具有统计学意义(P<0.01)。对各组大鼠行X线摄片,结果显示:BCP组大鼠于建模后6 d胫骨骨骺端可见骨髓质破坏,骨小梁缺损;于造模后第12 d,可见胫骨骨骺端骨质破坏明显增多,骨小梁破坏进一步加重;于造模后第18 d,可见胫骨髓质破坏严重,甚至可见骨皮质破坏,周围软组织肿胀。而sham组和normal组大鼠左侧胫骨正常,未见明显骨质结构破坏。Normal组和sham组相比,脊髓中G9a m RNA及蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。与normal组相比,BCP6d、BCP12d、BCP18d大鼠脊髓G9a m RNA分别为normal组的4.42±0.43、2.09±0.24、1.65±0.18倍,G9a蛋白分别为normal组的2.88±0.49、1.81±0.28、1.76±0.2倍,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:BCP大鼠脊髓G9a表达明显增多。第二部分:鞘内注射BIX-01294对大鼠骨癌痛的影响目的:观察鞘内注射BIX-01294对大鼠骨癌痛的影响。方法:雌性SD大鼠56只,随机分为normal组、sham组、BCP组、BCP+二甲亚砜(Dimethyl sulfoxide,DMSO)组、BCP+BIX-01294组、normal+DMSO组、normal+BIX-01294组,n=8。BCP+DMSO组、BCP+BIX-01294组、normal+DMSO组、normal+BIX-01294组分别于建模后第3 d鞘内注射DMSO或BIX-01294 5μg,各组鞘内注射药物容积均为10μl,1次/d,连续3 d。观察各组大鼠鞘内注射后的AS评分和PWT的改变。结果:与BCP组相比,鞘内注射BIX-01294可显著降低BCP大鼠AS评分,同时提高BCP大鼠的PWT(P<0.05或0.01);鞘内注射BIX-01294对normal大鼠AS评分和PWT无影响(P>0.05)。结论:鞘内注射BIX-01294可显著缓解大鼠骨癌痛。