【摘 要】
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【目的】探究恶性腹水形成过程中的免疫机制,并利用动物模型（Th1细胞敲除小鼠）探究TH1在恶性腹水形成过程中的作用,为恶性腹水的发病机制提供新的补充,为将来利用此进行治疗提供新思路。【方法】一、临床腹水患者标本的采集、检测及分析收集从2017年11月至2019年10月的腹水患者,运用流式细胞术,对腹水患者的外周血及腹水标本进行免疫细胞（Th1（CD4+IFN-γ+）、Th2（CD4+IL-4+）、
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【目的】探究恶性腹水形成过程中的免疫机制,并利用动物模型（Th1细胞敲除小鼠）探究TH1在恶性腹水形成过程中的作用,为恶性腹水的发病机制提供新的补充,为将来利用此进行治疗提供新思路。【方法】一、临床腹水患者标本的采集、检测及分析收集从2017年11月至2019年10月的腹水患者,运用流式细胞术,对腹水患者的外周血及腹水标本进行免疫细胞（Th1（CD4+IFN-γ+）、Th2（CD4+IL-4+）、Th17（CD4+IL-17+）、Treg（CD4+Foxp3+））检测并分析其特征二、动物模型的选择及构建,对临床患者标本检测结果的再现及验证1、用SD大鼠建立四氯化碳门脉高压性腹水模型和Walker-256恶性腹水模型,并分别对SD大鼠的恶性腹水模型及门脉高压性腹水模型的外周血和腹水标本进行流式检测,对临床标本检测结果进行验证。2、用C57BL/6小鼠建立四氯化碳门脉高压性腹水模型和H22、EAC、S180三种不同类型的恶性腹水模型,并运用流式细胞术对小鼠的恶性腹水模型及门脉高压性腹水模型外周血和腹水标本进行检测三、IFN-γ（Th1）基因敲除小鼠的鉴定和繁殖,构建IFN-γ基因敲除小鼠恶性腹水模型IFN-γ基因敲除小鼠杂合子相互杂交后,利用PCR-琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,筛选出纯合子,用健康的纯合子腹腔注射肿瘤细胞来构建基因敲除小鼠的恶性腹水模型四、基因敲除小鼠与野生型小鼠的恶性腹水模型的对比以及探究Th1细胞在恶性腹水形成过程中的作用挑选体重及周龄相近的C57BL/6小鼠和纯合IFN-γ基因敲除小鼠,控制同等条件下,构建恶性腹水模型,通过检查两种不同的小鼠的模型的生存曲线、腹水生成速度、腹膜通透性、PET-CT影像学等来比较并探讨Th1细胞在恶性腹水生成过程中的作用【结果】1.本研究共收集腹水56例,其中恶性腹水23例;良腹水29例,其中门脉高压性腹水21例,非门脉高压良性腹水6例（结核性腹水5例、肾病综合征1例）,不合并恶性腹水的混合性腹水2例（门脉高压性腹水合并结缔组织病1例,布加综合征合并结核性腹水1例）;病因不明腹水4例,另外还有健康参与者17人。结果显示TH1细胞在恶性腹水中比例低于其在门脉高压性腹水中比例,而TH2、TH17、Treg在恶性腹水中的比例都高于门脉高压性腹水。2.SD大鼠门脉高压性腹水模型以及恶性腹水模型均构建成功。在腹水及外周血检测中发现,Th1细胞的比例在恶性腹水中低于门脉高压性腹水,与临床患者标本检测结果一致3.H22、EAC、S180三种小鼠恶性腹水模型均成功构建。在综合肿瘤细胞的生长速度和增殖状况、小鼠成模率、死亡率及操作稳定性等,选择H22恶性腹水模型作为本实验主要实验模型对象。小鼠四氯化碳门脉高压性腹水模型构建失败,腹水成模率仅10%。4.基因鉴定成功筛选出后代的纯合子,当纯合子数量达到造模要求,在前期摸索的肿瘤细胞恶性腹水模型造模的最佳条件下,给予腹腔注射H22细胞,结果显示基因敲除小鼠的恶性腹水模型的成功构建。5.纯合子恶性腹水小鼠较野生型恶性腹水小鼠相比腹水生成更快,死亡率更高,腹膜血管通透性更高,PET-CT显示纯合子更易形成腹膜肿瘤及腹水【结论】在恶性腹水形成过程中,Th1细胞抑制小鼠恶性腹水的形成,Th1细胞的缺失促进恶性腹水小鼠的死亡
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