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Apoptin/VP3是由121个氨基酸组成的小分子蛋白,该蛋白由鸡贫血病毒(chicken anemia virus, CAV)编码产生,其能特异性诱导肿瘤细胞凋亡,而对正常细胞无凋亡诱导作用。研究表明其特异性肿瘤细胞诱导凋亡活性与其细胞核定位和Thr108磷酸化修饰密切相关,但其作用的具体机制尚未阐明。 众所周知,蛋白质的磷酸化修饰、亚细胞定位均与其相互作用蛋白质密切相关。目前发现了多种与 Apoptin相互作用的蛋白质,例如: anaphase promoting complex/cyclosome subunit1(APC/C),promyelocytic leukemia protein(PML)等,这些蛋白质均与Apoptin特异性诱导肿瘤细胞凋亡密切相关。我们在前期研究中通过酵母双杂交筛查出能与 Apoptin相互作用的蛋白质 AIP3B(AIPs,Apoptin Interaction Proteins),即FAM96B。并经免疫共沉淀证实了这种相互作用而且该相互作用不依赖于Apoptin的磷酸化修饰。通过文献检索得FAM96A与FAM96B属于同源蛋白,我们推测它们功能相近,故同步研究。FAM96A,FAM96B是高度保守的蛋白质,目前对它们的研究报道甚少,仅有 Tanaka K等报道了FAM96B和MMS19、Ciao1、XPD等组成一个不依赖于TFⅡH的大分子复合物,能调节TFⅡH的活性,在细胞有丝分裂过程中的染色体正常分离中发挥作用;沉默FAM96B的表达导致细胞不能正常有丝分裂,形成多核细胞。鉴于TFⅡH在细胞转录及核苷酸切除修复中的重要作用以及细胞的有丝分裂和细胞凋亡的密切关系,上述资料表明FAM96A,FAM96B可能具有重要的生物学意义,并在Apoptin的特异性诱导凋亡活性中扮演重要角色。因此,深入研究 FAM96A,FAM96B的功能及其在Apoptin的凋亡诱导活性中的作用具有重要的生物学意义。 我们首先采用Real-time PCR技术分析了FAM96A,FAM96B在肿瘤细胞HepG2和胎肝细胞L02中的表达变化;然后收集了手术切除并经病理诊断的人61例肺癌和42例肝癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁组织样本,采用Real-time PCR技术比较研究 FAM96A,FAM96B在肿瘤组织中的表达差异,并结合临床病理资料分析这种表达差异与肿瘤的分化及转移能力是否具有相关性。同时,我们构建了FAM96A,FAM96B的真核表达载体,通过脂质体转染在HepG2细胞内过表达FAM96A,FAM96B后,采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测HepG2细胞凋亡率,采用MTT法检测HepG2细胞存活率。 我们的研究结果发现:①在50例肺癌标本中有40例,FAM96A在肺癌组织中mRNA的表达水平显著低于癌旁组织,在56例肺癌标本中有36例,FAM96B在肺癌组织中mRNA的表达水平显著低于癌旁组织;结合临床病理资料分析, FAM96A,FAM96B的mRNA的表达水平与年龄,性别,分化程度,肿瘤类型没有相关性(P>0.05);然而,淋巴结转移、远端转移、肿瘤TNM分期等与FAM96A, FAM96B的mRNA表达水平明显相关(P<0.05),上述资料提示肿瘤的侵袭性越大,恶性程度越高,FAM96A,FAM96B在肺癌组织中的mRNA表达水平越低。②在42例肝癌标本中有40例,FAM96A,FAM96B在肝癌组织中mRNA的表达水平显著低于癌旁组织;FAM96B蛋白在肝癌肿瘤组织中的表达低于癌旁组织。结合临床病理资料分析,FAM96A,FAM96B的mRNA表达水平与年龄,性别,分化程度,肿瘤类型,肿瘤定位,肿瘤大小没有相关性(P>0.05);42例肝癌病人的发病年龄,发病性别,发病部位,是否携带乙肝,是否合并肝硬化与临床流行病学统计资料相一致。③FAM96A,FAM96B在HepG2细胞中mRNA的表达水平显著低于 L02细胞;FAM96B蛋白在 HepG2细胞中的表达低于 L02细胞;④HepG2细胞内过表达FAM96A,FAM96B能促进HepG2细胞凋亡,抑制HepG2细胞增殖。 以上结果均显示 FAM96A,FAM96B有可能是一种新的抑癌基因。上述研究将为FAM96A,FAM96B的功能研究提供新的资料,为Apoptin的诱导凋亡机制研究提供新的线索,并为Apoptin的最终临床应用创造条件。