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目的：本研究拟比较正常人膝滑膜细胞与OA滑膜细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)与其可能受体CD147的结合情况,探讨其结合途径,并进一步观察其结合后对滑膜细胞生长和增殖及下游细胞因子表达的影响,从而探究OPN与CD147结合在骨关节炎发病中的作用和意义。方法：1.培养鉴定人膝关节OA滑膜细胞和正常滑膜细胞。2.针对OPN基因SPP1及CD147基因BSG构建shRNA慢病毒载体,即OPN shRNA和CD147shRNA,包装获得高滴度病毒后转染正常人膝滑膜细胞与人膝OA滑膜细胞。3.体外培养人膝正常滑膜细胞和OA滑膜细胞,qPCR检测人膝正常滑膜细胞与OA滑膜细胞中OPN、CD147、PPIC、MMP-3及TNF-α的mRNA表达量；予以PPIC干预后采用免疫共沉淀法检测两种细胞OPN与CD147的结合情况。4.将体外培养人膝正常滑膜细胞和OA滑膜细胞各分成7组,共14组,分别予以添加OPN、OPN shRNA、CD147、CD147shRNA、 OPN+CD147.OPN+CD147+PPIC培养：N-A组：正常滑膜细胞空白对照组；N-B组：正常滑膜细胞+OPN;N-C组：正常滑膜细胞+OPN shRNA;N-D组：正常滑膜细胞+CD147;N-E组：正常滑膜细胞+CD147shRNA;N-F组：正常滑膜细胞+OPN+CD147;N-G组：正常滑膜细胞+OPN+CD147+PPIC;OA-A组：OA滑膜细胞空白对照组；OA-B组：OA滑膜细胞+OPN；OA-C组：OA滑膜细胞+OPN shRNA；OA-D组：OA滑膜细胞+CD147;OA-E组：OA滑膜细胞+CD147shRNA；OA-F组：OA滑膜细胞+OPN+CD147;OA-G组：OA滑膜细胞+OPN+CD147+PPIC.观察细胞克隆形成评价生长情况,MTT法测定增殖情况,采用Westernblot检测MMP-3和TNF-α表达情况。结果：1.采用Ⅱ型胶原酶及胰蛋白酶复合酶消化法成功分离培养原代滑膜成纤维细胞,白第4代起免疫细胞化学结果稳定。2.针对SPP1及BSG成功构建shRNA’慢病毒载体,并包装出108TU/ml数量级滴度的慢病毒颗粒。感染人滑膜细胞示该病毒以MOI=100使用感染效果最好。3.正常滑膜细胞OPN、CD147、PPIC、MMP-3及TNF-α的mRNA表达量分别为：1.00324022±0.076389036、0.99952589±0.045154528、1.00506933±0.110442982.1.00597389±0.10024154.1.00200722±0.077274527; OA滑膜细胞OPN、CD147、PPIC. MMP-3及TNF-α的mRNA表达量分别为：3.62885022±0.350909902、3.45538689±0.307717070、11.46923478±0.199208822、3.27354856±0.303610376、4.59285122±0.374560116,OA组与正常组比较各基因表达有显著性差异(P<0.05)。正常滑膜细胞OPN不能与CD147结合,添加PPIC后二者可结合。OA滑膜细胞在添加或不添加PPIC的情况下,OPN均可与CD147结合。4.正常滑膜细胞与OA滑膜细胞生长速率分别为59.67±2.52和61.67±3.21(P>0.05),正常滑膜细胞与OA滑膜细胞增殖速率分别为1.000±0.048和1.000±0.054(P>0.05)。同种细胞克隆形成及MTT结果示：A-B组间、A-D组间比较P<0.05；B-C组间、D-E组间比较P<0.05； F-G组间、B-G组间、D-G组间比较P<0.05；B-F组间、D-F组间比较P<0.05。5.正常滑膜细胞G组与F组的MMP-3表达量分别为0.341094182±0.017054709和0.211719491±0.010585975(P<0.05)； OA滑膜细胞G组与F组的MMP-3表达量分别为0.780861988±0.039043099和0.540081853±0.027004093(P<0.05)。正常滑膜细胞G组与F组的TNF-a表达量分别为0.61555±0.030777和0.501567±0.025078(P<0.05)；OA滑膜细胞G组与F组的TNF-α表达量分别为1.276453±0.063823和1.023901±0.051195(P<0.05)。结论：1.与正常滑膜细胞相比,OA滑膜细胞中OPN、CD147、 PPIC、MMP-3及TNF-α表达水平均显著性增高。2.无干预情况下,正常成纤维样滑膜细胞与OA成纤维样滑膜细胞在生长及增殖速度上无差别。3.滑膜细胞中,OPN与CD147结合,加快滑膜细胞生长增殖,启动下游通路、上调MMP-3及TNF-α表达。这或许是OA滑膜细胞处于病理状态的基础。