【摘 要】
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油菜(Brassica napus)是我国重要的油料作物之一,油菜菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一种真菌性病害,发病严重时可造成80%以上损失,病株减产10%~70%,油菜
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油菜(Brassica napus)是我国重要的油料作物之一,油菜菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一种真菌性病害,发病严重时可造成80%以上损失,病株减产10%~70%,油菜菌核病对油菜生产构成了极大威胁。目前,油菜菌核病的防治仍然以传统的农业防治和化学药剂防治为主,国内外至今还未培育出高抗油菜品种,也没有找到有效的高抗材料。SNARE复合体(可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子连接物复合体)在植物生理代谢过程和抗病防御反应中均发挥着重要作用。在模式植物拟南芥(Arabidopsis)中关于SNARE家族基因的研究比较深入,而在油菜中报道甚少。拟南芥中有9个定位在质膜上,称为SYP1家族基因,属于Qa-SNARE家族。为了深入研究油菜中SYP1突触融合蛋白的具体功能,以拟南芥的9个SYP1突触融合蛋白为探针,在油菜数据库里搜索SYP1相关的同源基因。采用生物信息学方法,对油菜中SYP1相关基因编码蛋白从氨基酸理化性质、亚细胞定位、保守结构域、高级结构及系统进化等几个方面进行了预测和分析。结果表明,油菜中含有27个SYP1突触融合蛋白相关基因;分别定位在细胞质、细胞核、内质网及囊泡分泌系统;它们均属于突触融合蛋白超家族;27个序列之间具有高度的相似性,与拟南芥SYP1家族也具有高度的同源性。系统进化树表明油菜SYP1突触融合蛋白和拟南芥中SYP1可能起源于共同的祖先。为了挖掘新的抗核盘菌的油菜基因资源,进一步探索油菜和核盘菌的互作机制。我们首先对油菜8个BnSYP1基因进行了时空表达分析,然后活体接菌两个不同油菜品种,实时荧光定量PCR分析6h和12h各个基因的表达情况。在油菜活体接菌结果分析过程中,我们发现基因BnaA04g05470D和在油菜核盘菌互作过程中上调显著,可以预测该基因在油菜与核盘菌互作过程中具有重要作用。为了进一步研究基因BnaA04g05470D在互作过程中的具体角色,我们构建了两个植物过表达载体PEG103-BnaA04g05470D和 PEG104-BnaA04g05470D。通过浸花转化的方法成功转入了拟南芥Co1-0野生型植株,并用除草剂Basta筛选获得了 T1代植株。为更深层次的研究该基因在油菜抗核盘菌过程中的具体功能及作用奠定了基础。
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