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经一次差速离心分别提取鸡胚尿囊液中的F48E8和N-79株鸡新城疫病毒（NDV），获得纯化抗原。用该纯化抗原加弗氏佐剂免疫Balb／c小鼠，取免疫鼠脾细胞和NSO骨髓瘤细胞用聚乙二醇（PEG4000）作细胞融合，经有限稀释法克隆和亚克隆，获得1株能稳定分泌抗NDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为FG1。经鉴定该杂交瘤细胞的平均染色体数为93.7条，杂交瘤细胞上清和腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1：512和1：64000。经Western-blotting证明单抗FG1针对NDV分子量为63KD的HN蛋白，且具有血凝抑制活性。FG1杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体与鸡法氏囊病毒、鸡喉气管炎病毒、鸡支气管炎病毒，鸡减蛋综合征病毒，鸡流感病毒均不发生交叉反应，有良好特异性。连续传代20次，5个月内冻存、复苏3次，FG1杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。利用FG1杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了单抗介导的、检测NDV的双抗体夹心ELISA。经测定，兔抗NDV高免血清的最佳包被浓度为1：1600，酶标单抗（HRP-McAb）的最佳工作浓度为1：200，其检测灵敏度为300ng／ml。所建立的双抗体夹心ELISA对NDV的检测是特异性的，与其它禽病病原不反应，能很好的对NDV进行定性检测，并具有较高的灵敏度。该方法尚需进一步研究、改进，并结合金标免疫层析做成试纸条，以用于生产实践中NDV的快速诊断。