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【研究目的】脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是由于炎症、肿瘤及外伤等原因引起脊髓神经元(spinal cord neurons,SCNs)胞体或突起变性或坏死,从而导致受损脊髓平面以下的相关感觉、运动、括约肌及自主神经功能障碍,是一种严重的致残性损伤病变。在我国,因SCI而导致截瘫的患者呈现逐年增高趋势,给社会及家庭带来沉重的经济负担,给个人的身体和身心造成长久的压力。随着SCI研究的逐渐深入,如何在损伤早期保护SCNs,延缓SCNs进入程序性死亡的时间,减少SCNs凋亡的数量是SCI研究的重中之重。近年来研究发现,多种micro RNA(mi RNA)在SCI前后自身的表达水平发生了改变,这些参与调控基因转录后表达的mi RNA的表达变化直接参与了神经元损伤后基因表达的调控,进而参与SCI后炎症、胶质瘢痕形成及神经元坏死等一系列病理生理过程。依据文献及我们前期的研究结果发现,mi RNA-93在脊髓损伤后表达呈上升趋势,与此同时,mi RNA-93表达增高促进了SCNs突起的生长。因此,我们期望进一步深入探讨mi RNA-93在SCI中的作用,对SCNs突起的生长的影响及mi RNA-93调控SCNs生长的相关作用机制。【研究方法】首先,我们制备了大鼠脊髓损伤模型,运用Real-time PCR检测了SCI后不同时间点一系列micro RNA的表达变化,依据实验结果,筛选出表达变化差异较大的micro RNA分子做体外功能实验,观察相关micro RNA分子对体外培养的大鼠SCNs突起生长的影响,结果显示,mi RNA-93过表达显著促进了SCNs突起生长。基于上述实验结果,我们运用体内及体外大鼠SCI模型,观察mi RNA-93对SCNs突起生长及再生的影响,对星形胶质细胞增生和活化的影响,对小胶质细胞增生及活化的影响,对脱髓鞘的影响;明确mi RNA-93在SCI后的相关功能并运用Dual-luciferase reporter实验验证mi RNA-93调控的靶蛋白后,Western-blot实验探寻mi RNA-93调控SCNs生长的相关信号通路分子及相关作用机制。【研究结果】(1)mi RNA-93在大鼠脊髓损伤后表达呈上升趋势;(2)在体外培养的大鼠SCNs中过表达mi RNA-93促进了SCNs突起的生长;(3)在体内大鼠SCI模型中过表达mi RNA-93增加了β-Ⅲ-tubulin阳性的神经元细胞数量,抑制了GFAP阳性的星形胶质细胞的增殖,同时也减少了Iba-1阳性的小胶质细胞的活化,对少突胶质细胞也有一定的保护作用;(4)在体外培养的大鼠SCNs中过表达mi RNA-93抑制了神经元生长发育相关蛋白Eph A4的表达,Dual-luciferase reporter实验显示,mi RNA-93能够结合到Eph A4的3’untranslated region(3’UTR)区域,从而抑制Eph A4蛋白的表达;(5)mi RNA-93通过直接作用于Eph A4调控p-ephexin及active Rho A的活性,促进神经元突起生长。【研究结论】大鼠SCI导致mi RNA-93表达增高,增高的mi RNA-93能够通过作用于Eph A4的3’UTR区抑制Eph A4的表达,从而促进大鼠SCNs的生长;与此同时,mi RNA-93能够通过抑制星形胶质细胞及小胶质细胞活化,保护髓鞘完整性等间接方面进一步保护SCNs免于二次损伤。mi RNA-93通过调控Eph A4-ephexin-Rho A信号通路调控脊髓神经元突起的生长与再生。