鸡源大肠杆菌的分离鉴定及四环素类耐药基因检测研究

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大肠杆菌病的流行和传播给养殖业带来重大损失,鸡大肠杆菌病主要表现为大肠杆菌性败血症、肝周炎、心包炎及卵黄性腹膜炎等,大肠杆菌还可以通过污染鸡蛋、蛋制以及耐药性的传播进而威胁人类健康,因此,开展鸡源大肠杆菌相关研究具有重要的经济学和公共卫生学意义。本研究以分离自陕西部分规模化养殖场的158株鸡源大肠杆菌为对象,研究其对四环素类药物的耐药性以及相关耐药基因携带情况,并尝试探讨耐药性与耐药基因之间的相关性,为进一步阐明大肠杆菌耐药性产生的机制,以及临床疾病防控提供理论支持。1.无菌法采取陕西部分规模化养鸡场的病、死鸡肝脏样本,分别接种麦康凯琼脂和伊红美兰琼脂,挑取典型单菌落纯化培养,对疑似大肠杆菌进行生化鉴定及血清型鉴定。结果显示,从450份肝脏样本中共分离鉴定大肠杆菌菌株158株,优势血清型为O78和O38。2.参照CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法对158株鸡源大肠杆菌进行4种四环素类药物的敏感性试验。结果显示,鸡源致病性E.coli分离株对四环素、氯四环素、氧四环素以及多西环素的耐药率分别为88.6%、77.2%、87.3%、50.6%,158株大肠杆菌中多重耐药菌株高达78.5%;3.根据GenBank中已发表的大肠杆菌四环素类耐药基因序列,用Primer5.0软件设计了3对特异性引物,PCR检测3种四环素类耐药基因,用DNAStar软件对获得的耐药基因序列与GenBank中的相关序列进行比对。结果显示,四环素类耐药基因tetA、tetB的检出率分别为81.4%和20.7%,未检测到tetC基因;鸡源致病性E.coli对四环素类抗生素的耐药性普遍存在,且以多重耐药为主;耐药基因tetA的检出率与其耐药性呈正相关。
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