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第一部分不同动脉粥样硬化相关人群外周血ghrelin水平变化及意义背景Ghrelin与其受体结合后具有广泛生物学效应。已知ghrelin受体mRNA在心血管组织分布广泛，已有的研究显示ghrelin可通过抑制炎症、抗凋亡、调节脂质代谢等不同途径对心血管起到保护作用，然而其不同动脉粥样硬化相关人群外周血ghrelin水平变化如何，其变化是否与疾病相关等方面的研究尚未见报道。目的通过检测不同人群外周血ghrelin水平，初步探讨ghrelin水平变化情况及其临床意义。方法及结果将不同年龄、冠心病、肥胖、糖尿病患者纳入研究对象，进行对照研究。通过酶联免疫吸附试验检测入选者外周血ghrelin水平，并同时抽血送检入选者一般生化指标如TC、TG、HDLc等，搜集临床资料，分析一般临床特征包括：年龄、性别、吸烟、BMI、高血压等。检测发现，与青年组ghrelin水平（2．51±0．77）ng／ml相比，老年组ghrelin水平（1．43±0．64）ng／ml显著降低，p=0．009；老年组与中年组ghrelin水平（2．24±0．32）ng／ml相比，ghrelin降低程度亦呈现显著统计学差异，p=0．036，随着年龄增长，外周血ghrelin水平显著降低，两者之间显著相关，rp=-0．564，p=0．015；经校正后，冠心病组外周血ghrelin水平为（1．82±0．34）ng／ml，与对照组（3．00±0．29）ng／ml相比，p=0．025，具有显著统计学差异；肥胖组（BMI≥28Kg／m2）外周血ghrelin浓度（1．87±0．89）ng／ml显著低于对照组（2．77±1．49）ng／ml，p=0．047；糖尿病患者外周血ghrelin水平（2．41±0．74）ng／ml显著低于对照组（3．35±13．02）mg／ml，p=0．013。结论由上可知，随着年龄增加，外周血ghrelin水平呈现降低趋势；冠心病、肥胖、糖尿病均可导致外周血ghrelin水平进一步降低。为今后进一步阐明ghrelin的功能奠定了一定基础。第二部分Ghrelin可通过抑制Th17细胞促炎作用延缓动脉粥样硬化进展背景Th17细胞是近年来发现的一种CD4+效应T细胞，可特异性产生IL-17，在炎症性疾病中起着重要调节作用。已知，IL-17可促进单核巨噬细胞分泌炎症因子TNF-α，IL-6并与其发挥协同作用，加强炎症反应。由于AS是一种慢性炎症性疾病，且与其密切相关的IL-17、IL-6及TNFα在厌食-恶液质综合症发病中起着重要作用，ghrelin作为重要的食欲调节激素与上述炎症因子的关系如何及其对AS的影响是否与上述炎症因子有关尚未见报道。目的通过检测颈动脉粥样硬化患者外周血ghrelin及Th17细胞含量的变化及观察应用ghrelin干预患者PBMCs后上述炎症因子的表达变化，初步探讨ghrelin延缓AS的病理机制。方法经颈动脉超声检查将入选对象分为两组，即AS组37例和对照组31例（以颈动脉内-中膜厚度-IMT≥1．2mm为标准分组）。采用流式细胞分析法，检测各组患者外周血Th17细胞占CD4+T细胞百分比；应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者外周血Ghrelin含量，同时检测患者外周血浆Th17相关因子：白介素（IL）-17、IL-6、肿瘤坏死因子（TNF）-α水平；体外培养AS组患者外周血单个核细胞，经Ghrelin干预后观察上述炎症因子水平变化。结果AS组患者外周血Th17／CD4+T细胞百分比为（1．92±0．52）％，明显高于对照组（0．59±0．32）％，P＜0．05；外周血Ghrelin浓度分别为（2．19±0．84）ng／ml、（3．54±1．04）ng／ml，差异具有显著性，P＜0．05；Th17相关炎症细胞因子（IL-17、IL-6、TNF-α）水平在AS组分别为（101．29±25．00）pg／ml、（7．67±3．58）pg／ml和（17．98±3．16）pg／ml，显著高于对照组（76．97±27．64）pg／ml、（3．89±3．50）pg／ml、（6．38±1．27）pg／ml，具有显著统计学意义，P＜0．05；应用Ghrelin干预患者PBMCs后发现，上述炎症因子分泌明显受抑，且呈浓度依赖性，组间相比差异具有显著性，P＜0．05；患者血浆Ghrelin浓度与颈动脉内膜厚度呈显著负相关（r=-0．498，P＜0．05），与Th17相关炎症因子（IL-17、IL-6、TNF-α）水平呈负相关（相关系数分别为r=-0．544、-0．363、-0．565，P＜0．05）。结论Ghrelin通过抑制Th17相关炎症因子表达延缓动脉粥样硬化进展。第三部分Ghrelin对THP-1源性巨噬细胞泡沫化过程中酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1表达的影响背景目前关于动脉粥样硬化的发病机制存在着诸多学说，如损伤-反应学说、炎症学说等。然而，我们注意到，所有学说最终都归结为泡沫细胞形成，因此，研究泡沫细胞形成机制，对于有效预防动脉粥样硬化的发生、发展具有重要意义。人酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（Acyl-CoA：cholesterol acyltransferases，ACAT-1）催化细胞内游离胆固醇形成胆固醇酯，进而形成泡沫细胞，在泡沫细胞形成过程中起着重要作用，抑制巨噬细胞内ACAT1功能将有助于减少泡沫细胞形成，起到抗AS作用。我们在前期实验中发现ghrelin本身可通过上调膜转运蛋白ATP结合盒转运子A1促进泡沫细胞内游离胆固醇流出，抑制泡沫细胞形成。因此，如果ghrelin同时具有下调ACAT1的功能，抑制游离胆固醇的酯化过程，将有助于我们进一步明确ghrelin延缓AS进展的机制。此方面的研究尚未见报道。目的研究单核／巨噬细胞分化成为泡沫细胞过程中Ghrelin对人酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶1（ACAT-1）表达以及细胞内胆固醇酯的影响。方法体外培养人源单核细胞系（THP-1），由佛波酯（PMA）作用将其诱导分化为巨噬细胞，后者可在氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）存在条件下进一步转变为泡沫细胞。实验分为对照组（Ox-LDL）、不同浓度ghrelin干预组(10-5、10-6、10-7 mol／L)以及不同时间干预组（Ghrelin 10-5 mol／L+Ox-LDL100mg／L）。巨噬细胞加入不同浓度的Ghrelin预孵两小时后再加入Ox-LDL（100mg／L），作用24h；换液，各组均加入10mg／L的apoA-I，并在含有0．3％BSA的RPMI1640培养基、CO2培养箱中孵育12h，采用酶法，通过荧光分光光度计检测细胞内胆固醇酯含量化，采用油红O染色法观察细胞内脂滴含量，运用RT-PCR法检测ACAT-1 mRNA水平，Western-blot法检测ACAT-1蛋白表达。结果Ghrelin可明显减少THP-1源性泡沫细胞内脂滴的形成；Ghrelin可显著降低细胞内胆固醇酯含量，随着Ghrelin浓度升高，胞内胆固醇酯含量分别降低了（14．6±0．5）％，（28．3±1．5）％和（45．4±1．0）％，组间相比差异显著，且胞内胆固醇含量与ACAT-1蛋白及mRNA表达明显相关，相关系数r分别为0．968、0．943；Ghrelin能显著降低单核／巨噬细胞泡沫化过程中ACAT-1 mRNA水平和蛋白表达，组间相比具有显著统计学差异，且此干预作用呈浓度依赖性；Ghrelin不同时间干预组之间油红O染色结果显示脂滴变化不明显，ACAT1表达无明显差异，p＞0．05。结论Ghrelin可在转录及翻译水平通过下调ACAT-1表达，减少胞内胆固醇蓄积，抑制泡沫细胞形成；Ghrelin对ACAT1的抑制效应呈现浓度依赖性，无时间依赖性。