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鸭病毒性肝炎（Duck viral hepatitis,DVH）是由鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）引起的一种以雏鸭痉挛、角弓反张和肝脏肿胀出血为主要特征的急性传染病。自1963年我国首次报道了鸭病毒性肝炎之后,在浙江、福建、北京、山东等地均有该病的流行,患病雏鸭精神沉郁、垂头缩颈、行动呆滞,发病后短时间内迅速死亡,发病率可达100%,死亡率可达95%～100%。该病在我国一直以DHAV-1和DHAV-3的流行为主,但近几年来在我国山东等部分地区开始相继出现DAstV-1的感染,从而进一步加大了对鸭病毒性肝炎的防控难度,同时给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。目前对于该病多种血清型的防控没有一个整体的预防和治疗措施。卵黄抗体是免疫蛋鸡的鸡蛋中提取的针对特定抗原的抗体,是卵黄中的一种免疫球蛋白,具有良好的稳定性、耐热性、耐酸性,同时安全、高效、无残留,治疗效果显著,特异性好,适合实际生产。本研究选用DHAV-1、DHAV-3及DAstV-1毒株制备鸭病毒性肝炎三价油乳剂灭活疫苗,对产蛋高峰期的蛋鸡进行免疫,制成了鸭病毒性肝炎三价卵黄抗体,研究制备的卵黄抗体对DHAV-1、DHAV-3及DAstV-1病的预防及治疗效果,从而为我国鸭病毒性肝炎病整体的预防与治疗提供一种有效、快速的生物制品,为鸭病毒性肝炎病的综合防控提供一定的技术支持。1.DHAV-1、DHAV-3及DAstV-1毒株的动物回归试验将本实验室前期已经分离鉴定保存的DHAV-1、DHAV-3及DAstV-1毒株作为疫苗株并进行动物回归试验。结果显示,当腿部肌肉注射0.4 mL DHAV-1(TCID50=10-5.65/0.1mL)病毒液后,雏鸭出现精神沉郁、采食下降、羽毛杂乱、角弓反张,并在短时间内死亡,对死亡雏鸭进行剖检可见肝脏肿大、密布针尖大小的出血点;当腿部肌肉注射0.4 mL DHAV-3(TCID50=10-5.35/0.1mL)病毒液后,雏鸭出现与DHAV-1相似的临床症状及剖检变化,不同的是死亡时间相较于DHAV-1要晚一些;当腿部肌肉注射0.2 mL DAstV-1(TCID50=10-5.69/0.1mL)病毒液后,雏鸭出现与DHAV-1相似的临床症状,但死亡时间和死亡率不及DHAV快和高,剖检可见肝脏肿大、有出血点及带状出血,肾脏肿大出血。2.鸭病毒性肝炎三价油乳剂灭活疫苗的制备将三种抗原液经甲醛灭活后按1:1:1体积混合,与吐温-80按96:4的比例混合作为制备疫苗的水相,将油相与水相按2:1的比例进行乳化,制备鸭病毒性肝炎三价油乳剂灭活疫苗,并对疫苗进行性状检验。结果表明,抗原液最佳灭活条件为终浓度为1.0‰的甲醛37℃灭活24 h;性状检验结果表明,该疫苗为油包水型,离心稳定性良好,未见细菌、霉菌及支原体等微生物污染。3.鸭病毒性肝炎三价卵黄抗体的制备将制备的油乳剂灭活疫苗免疫蛋鸡,收集第四次免疫后的高免蛋制成卵黄抗体,利用鸭胚中和试验来检测卵黄抗体中DHAV-1、DHAV-3的效价,利用间接ELISA方法检测卵黄抗体中DAstV-1的效价。对提取的卵黄抗体进行性状检验、雏鸭预防保护试验及雏鸭攻毒治疗试验。卵黄抗体检测效价结果显示,收集第四次免疫后的高免蛋制成的卵黄抗体中DHAV-1中和效价为2-7.16（1:143）、DHAV-3中和效价为2-8（1:256）、DAstV-1 ELISA效价为2-9（1:512）。性状检验结果显示,该抗体为淡黄色透明澄清的液体,久置后会有少量白色沉淀。卵黄抗体安全性良好,3日龄雏鸭颈部皮下注射1.0 mL,未见局部红肿及全身性不良反应。雏鸭预防保护试验结果显示,当雏鸭在3日龄时分别腿部肌肉注射1 mL该卵黄抗体时,可以有效预防DHAV-1、DHAV-3及DAstV-1的侵害,预防保护效果良好。雏鸭攻毒治疗试验结果显示,当雏鸭感染病毒后,在感染病毒后6 h注射1.0 mL卵黄抗体对DHAV-1、DHAV-3的治愈率最高,在感染病毒后12 h注射1.0 mL卵黄抗体对DAstV-1的治愈率最高,治疗效果最好。综上所述,本研究制备的鸭病毒性肝炎三价卵黄抗体具有良好的预防保护效果,且对感染雏鸭具有较好的治疗效果,能够对目前我国主要流行的DHAV-1、DHAV-3及近几年来出现的DAstV-1的侵害起到良好预防和治疗作用,为当前我国对于鸭病毒性肝炎的预防与治疗提供了一种快速、有效的新型生物制品,为鸭病毒性肝炎病的综合防控提供了一定的技术支持。