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哺乳动物中,白介素-12(Interleukin-12,IL-12)是由IL-12p35和IL-12p40亚基构成的异源二聚体分子,其主要来源于先天性免疫细胞,尤其是巨噬细胞和树突状细胞等抗原递呈细胞。IL-12的主要功能是诱导CD4~+T细胞向I型辅助性细胞(type I helper T cell,Th1)分化,并促进其产生大量的IFN-?来辅助清除感染的病原菌,从而在机体的先天性和适应性免疫之间发挥桥梁作用。在包括草鱼在内的多种硬骨鱼中,由于发生全基因组复制事件,导致IL-12存在多种异构体。与哺乳动物相比,鱼类IL-12更为复杂。但目前还缺乏对鱼类IL-12异构体蛋白诱导表达及细胞来源信息的研究。因此,本论文以草鱼巨噬细胞和树突样细胞为模型,通过Western Blotting方法,探究热失活的嗜水气单胞菌(heat-inactivated Aeromonas hydrophila,HI A.hydrophila)和重组草鱼IL-1?蛋白(recombinant grass carp IL-1?,rgcIL-1?)对IL-12异构体蛋白的诱导表达特征和相关机制。具体地,首先采用贴壁法分离获得了草鱼巨噬细胞,并从细胞形态学进行了鉴定;又建立分离草鱼头肾树突样细胞的方法,从细胞形态和细胞表面特征分子如cd80/86、cd83和mhc2dab的转录水平鉴定为树突样细胞。然后,在验证了委托制备的IL-12p35a和IL-12p35b多克隆抗体的特异性基础上,探究草鱼IL-12在两种先天免疫细胞中的诱导表达特征。结果发现热失活A.hydrophila能够在短时间内诱导巨噬细胞中由IL-12p35a亚基所组成的草鱼IL-12的蛋白合成和分泌水平,同时刺激巨噬细胞胞内IL-12p40a/b/c三种亚基的蛋白合成,暗示IL-12可能在嗜水气单胞菌感染早期发挥免疫调控作用。进一步探究热失活A.hydrophila短时间内上调IL-12的蛋白合成水平的相关机制,用RNA合成抑制剂放线菌素D与热失活A.hydrophila联合处理草鱼巨噬细胞,发现热失活A.hydrophila短时间内诱导草鱼IL-12蛋白表达不受其基因转录水平的影响。与之对应地,热失活A.hydrophila也能够在短时间内上调树突样细胞胞内IL-12p40b和IL-12p40c亚基蛋白的合成水平,但对IL-12p35a和IL-12p40a亚基的蛋白表达无作用,表明热失活A.hydrophila对两类先天免疫细胞的刺激作用不同,提示在嗜水气单胞菌感染条件下,可能主要由巨噬细胞产生IL-12p35a构成的IL-12异构体。由于热失活A.hydrophila处理条件下蛋白成分复杂,IL-12p35b抗体的特异识别能力不足,未能获得热失活A.hydrophila对草鱼IL-12p35b亚基的蛋白诱导表达数据。在嗜水气单胞菌感染草鱼的炎症反应中,IL-1?是感染早期产生的经典促炎症因子,揭示它是否参与调控IL-12的蛋白表达,有利于进一步了解炎症条件下IL-12的产生特征。使用rgcIL-1?处理巨噬细胞,发现rgcIL-1?能够诱导巨噬细胞中由IL-12p35a亚基组成的IL-12的蛋白合成和分泌,但对IL-12p35b亚基的蛋白合成和分泌无作用。进一步探究机制发现,阻断NF-?B信号通路后,rgcIL-1?上调IL-12p35a亚基的蛋白合成被抑制到本底水平,并且其分泌水平也被明显的抑制。因此,rgcIL-1?对巨噬细胞中IL-12p35a亚基蛋白的诱导表达作用通过NF-?B信号通路调控。另外,rgcIL-1?诱导巨噬细胞中IL-12p40a/b/c亚基的蛋白合成存在明显差异,提示草鱼IL-12p40三个亚基蛋白诱导表达的调控机制可能不同。综上所述,本论文首次在硬骨鱼中系统比较了草鱼巨噬细胞和树突样细胞中IL-12多种异构体蛋白的诱导表达特征。草鱼IL-12p35a亚基在两种先天免疫细胞中诱导表达的差异,暗示在嗜水气单胞菌感染条件下,可能主要由巨噬细胞产生基于IL-12p35a亚基的IL-12异构体。此外,在草鱼巨噬细胞中,rgcIL-1?可能通过NF-?B信号通路调控由IL-12p35a亚基组成的IL-12的产生。这些关于草鱼IL-12异构体蛋白在先天免疫细胞中的诱导表达特征,有利于认识鱼类IL-12异构体在先天免疫中的地位。