单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称Lm)是一种革兰氏阳性食源性致病菌,它能在多数固体表面形成生物被膜,抗逆性增强,难以清除,严重威胁食品卫生安全。虽然Lm对绝大多数常见的抗生素都是敏感的,在临床上经常使用抗生素来治疗李斯特菌病,但越来越多的文献报道显示Lm耐药性已逐渐增强。细菌的形态结构与其生理功能、免疫原性以及致病性等息息相关。L-鼠李糖广泛存在于许多病原菌的细胞壁及荚膜中,rmlB基因编码L-鼠李糖合成中的关键酶。本文探究了 mlB基因在Lm生理特性、耐药性、生物被膜形成和毒力方面的作用。1)通过同源重组的方法敲除Lm染色体上的rmlB基因,成功构建了 EGDeArmlB缺失菌株。2)比较野生菌株与rmlB缺失菌株在细菌生长、形态结构、运动性及抗逆性等方面的变化,结果表明:缺失rmlB基因对Lm的生长、抗逆性、细胞形态、细胞壁结构及运动性并未造成显著影响。暗示:在Lm中,鼠李糖合成并不是细菌形态、生长和运动所必须的细胞功能途径。3)通过最低抑菌浓度法、K-B纸片琼脂扩散法、抗生素耐受试验方法比较了野生菌株与rmlB缺失株在耐药性方面的差异,并通过RT-PCR检测缺失菌株中PBPs编码基因转录表达。结果显示:同野生菌株相比,rmlB缺失菌株对头孢菌素和杆菌肽等作用位点在细菌细胞壁和细胞膜的抗生素的敏感性显著增加(p≤0.01),其可能机制与lmo2229(Lm青霉素结合蛋白PBP4的编码基因)表达量降低相关。4)利用微孔板法和荧光染色法观测rmlB缺失菌株生物被膜形成能力的变化。结果显示:与野生菌株相比,rmlB缺失菌株生物被膜形成能力显著降低(p≤0.01),但是生物被膜形成早期的粘附过程并无明显变化。5)利用RT-PCR检测缺失菌株中主要毒力基因prfA、plcA、plcb、hly、actA、mpl以及gtcA的转录表达,并观察rmlB缺失对细菌溶血活性的影响。结果显示:rmlB缺失后hly和gtcA基因的表达量显著性下调,同时缺失菌株的溶血活性也发生显著降低(p≤0.01),但是包括毒力基因转录调控蛋白PrfA在内的其它主要毒力因子的表达都没有受到明显影响。综上所述:rmlB基因在Lm生物被膜形成和耐受作用位点在细胞壁和细胞膜的抗菌剂及细菌毒力方面具有重要作用。