本文主要从以下几个部分展开论述:　　第一部分 大鼠睾丸支持细胞原代培养和鉴定　　目的:培养高纯度的大鼠睾丸支持细胞,通过多种方法对培养细胞进行鉴定。　　方法:选用18~22天龄SD雄性大鼠,处死后立即取睾丸组织,依次用0.25％的胰蛋白酶、0.1%透明质酸酶和0.1%的胶原酶消化分离支持细胞,置于32℃5%CO2培养箱培养,48h后用20mmol/L Tris-HCl低渗处理培养细胞。培养1周后应用吖啶橙染色、Feulgen染色及免疫组化法检测FasL鉴定分离培养的支持细胞。　　结果:培养1周后所获得的睾丸支持细胞纯度达95%以上。分离培养的支持细胞FasL表达阳性,其形态结构特征与用其它方法鉴定为支持细胞的形态结构特征一致。　　结论:本实验培养方法可获得高纯度的睾丸支持细胞,可以很好地应用于后续的实验研究。　　第二部分 RNAi抑制大鼠睾丸支持细胞uPA基因表达　　实验一：siRNA转染大鼠睾丸支持细胞条件优化　　目的:观察化学合成siRNA阻断大鼠睾丸支持细胞内源性基因表达的可行性,并优化转染条件。　　方法:按已建立方法分离、培养支持细胞,应用化学合成的不同浓度针对GAPDH的siRNA在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下转染原代睾丸支持细胞。RT-PCR检测大鼠支持细胞中GAPDH mRNA水平的变化,MTT法检测支持细胞的活率。　　结果:转染终浓度为150nmol/L的siRNA能特异性有效的阻断GAPDH基因的表达,细胞毒性随着浓度的提高而增强,终浓度为200nmol/L的siRNA对细胞有明显毒性。　　结论:siRNA能在大鼠睾丸支持细胞内启动RNA干扰,150nmol/L的siRNA能特异有效地阻断内源基因并保持较高的细胞活性。　　实验二：siRNA抑制大鼠睾丸支持细胞uPA基因表达　　目的:利用化学合成siRNA抑制大鼠睾丸支持细胞uPA基因的表达,并筛选抑制效果最佳的siRNA序列。　　方法:体外取SD大鼠睾丸,分离、培养支持细胞,应用3对针对大鼠uPA基因的siRNA序列(uPA siRNA1、uPA siRNA2、uPA siRNA3)和1对阴性对照siRNA,在阳离子脂质体LipofectamineTM2000介导下转染原代睾丸支持细胞。RT-PCR检测大鼠支持细胞中uPA mRNA水平的变化,Westren blot法检测uPA蛋白表达水平。　　结果:uPA siRNA1、uPA siRNA2和uPA siRNA3转染后大鼠睾丸支持细胞uPA mRNA和uPA蛋白表达与空白对照组相比均有下降,其中uPA siRNA1组更为明显,阴性对照siRNA组未引起uPA mRNA和uPA蛋白表达的明显变化。　　结论:体外化学合成的uPA siRNA能特异有效地下调大鼠睾丸支持细胞内uPA基因表达,不同序列特异性的siRNA下调uPA基因表达的能力不同。