猪GFAT1与SLC2A基因家族中6个基因克隆、定位、SNP检测及与生产性状的关联分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weiluguang
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本论文根据比较基因定位信息,并结合公共数据库中的EST资源,分离猪葡萄糖代谢通路上的GFAT1基因及SLC2A基因家族中的6个基因,通过对其克隆、染色体定位、组织表达谱分析、多态位点检测及与生产性状的关联分析,为进一步研究猪胴体、生长、肉质性状打下基础,并为将来应用于分子标记辅助选择育种提供初步依据。主要研究结果如下:1.分别依据人cDNA信息获得的猪EST所构建的EST重叠群设计的猪特异引物,分离克隆了猪GFAT1、SLC2A2、SLC2A3、SLC2A4、SLC2A5、SLC2A8和SLC2A12共七个基因的基因片段,部分序列已提交GenBank数据库,获得了GenBank收录号,分别为EF011104(SLC2A2)、EF012367(SLC2A3)、EF012368(SLC2A5)、EF012369(SLC2A8)、EF012370(SLC2A12)。2.分别利用体细胞杂种板和辐射杂种板技术对其中六个基因进行了染色体定位。结合两者结果表明GFAT1基因定位在猪3q21-q27,与SW828(LOD=12.39)紧密连锁;SLC2A2基因定位在猪13q23-(1/2 q41),与S0084紧密连锁(LOD=4.29);SLC2A3基因定位在猪5q25,与SW963(LOD=14.46)紧密连锁;SLC2A5基因定位在猪6q22-q23,与SW1355(LOD=6.65)紧密连锁;SLC2A8基因定位在猪1q28-q213,与SW705(LOD=4.32)紧密连锁;SLC2A12基因定位在猪1p24-p25,与SW1851(LOD=6.22)紧密连锁。3.以成年长白母猪和成年通城猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪、小肠、胃各9个组织及出生4天长大杂交小猪肌肉、心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏6个组织作为研究材料,利用RT-PCR检测了猪GFAT1基因在上述组织的表达,结果发现,GFAT1基因在各组织均表达,但在骨骼肌和心肌中存在两个转录本。以成年通城猪的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脂肪、小肠、胃、各9个组织作为研究材料,利用RT-PCR检测了猪SLC2A4基因在每个组织中的表达情况,结果发现,该基因在多数组织中表达,但在骨骼肌和心肌中表达量较高。4.在GFAT1基因第8内含子中发现了MvaI—RFLP(G-A)多态位点;在SLC2A4基因第4外显子中发现了HinlI—RFLP(T-C)多态位点,该突变位点没有引起氨基酸的改变。采用PCR—RFLP分析技术,利用不同猪群进行基因型检测,结果表明,GFAT1基因在国内品种(通城猪)中呈偏态分布(G等位基因频率为0)、在大长通中具有丰富多态性;SLC2A4基因在各品种中均具有多态性。5.利用SAS8.2中的广义线性模型(GLM)程序,以本室与通城县畜牧局种畜场合作所建立的试验群体(含通城、长白、大白、长大通和大长通猪群)为研究对象,检测了GFAT1第8内含子MvaI—RFLP位点的多态性,分析该基因与部分生产性状的关联,初步研究结果显示该位点的不同基因型与胴体性状的臀中肌中点处膘厚和胴体直长显著相关(P<0.05);同时也分析了SLC2A4第4外显子HinlI—RFLP位点的多态性,并检测了其与部分生产性状的关联,结果显示该位点不同基因型与肉质性状中的肌肉剪切力值存在显著相关(P<0.05)。
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