地黄花叶病毒(ReMV)移动蛋白(MP)和外壳蛋白(CP)基因介导的抗病性研究

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以含地黄花叶病毒(ReMV)移动蛋白(MP)基因全长cDNA的质粒pTMPF为模板,利用PCR方法,对ReMV MP基因进行缺失改造,分别获得了5′端缺失600nt(1/4MP)、400nt(1/2MP)和200nt(3/4MP)的缺失型MP基因。通过中间载体pROK219,将上述三种缺失型MP基因克隆到双元植物表达载体pBIN19上,构建了ReMV MP基因3种不同形式的植物表达载体pBMP202,pBMP406和pBMP603。利用直接冻融转化法将上述3种植物表达载体和本实验室已有的ReMV全长MP基因(pBMPF)、5′端缺失18nt MP基因(pBMPD)以及ReMV外壳蛋白(CP)基因的植物表达载体(pBinCP)转入土壤农杆菌LBA4404中。然后,在土壤农杆菌LBA4404介导下转化烟草品种“云烟87”,获得了所有6种植物表达载体的转基因植株,并对其分别进行了初步的PCR检测和抗病性鉴定。对R0代转基因植株的初步抗病性分析发现,不同形式MP基因的转基因植株对烟草花叶病毒蚕豆株系(TMV-B)表现不同程度的抗性。pBMPF和pBMPD转化烟草与对照相比,表现症状略有推迟,但后期的抗病性表现不太明显。pBMP202和pBinCP转化烟草表现了比较好的抗病性,抗病性表现主要为推迟发病和后期恢复健康。
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